基于猴病毒40（SV40）載體在COS7細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制沒有節(jié)制并對細(xì)胞具有致死性,長期以來SV40載體-COS7系統(tǒng)只被用作瞬時表達。本研究的最初設(shè)想是通過在SV40載體的復(fù)制中引入負(fù)反饋機制,而使載體能在COS7細(xì)胞進行穩(wěn)定表達。pctPA是實驗中作為對照的重組質(zhì)粒,該質(zhì)粒是含SV40復(fù)制起始點（ori）_、t-PA（人組織型纖溶酶原激活劑）基因和新霉素篩選基因的SV40載體。鑒于pctPA的復(fù)制失控潛能,我們推測其難以在COS7細(xì)胞內(nèi)建立穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。但結(jié)果與預(yù)期的相反,COS7細(xì)胞轉(zhuǎn)染pctPA并以G418篩選4周后,長出多個形態(tài)與正常COS7細(xì)胞相似的抗性克隆。Southern Blot分析顯示,在穩(wěn)定的COS7抗性細(xì)胞中,質(zhì)粒pctPA以染色體外附加體的形式存在,平均每細(xì)胞約含300個拷貝。提示載體在COS7細(xì)胞中的復(fù)制受到反式抑制。在COS7抗性細(xì)胞的培養(yǎng)液上清中,溶圈實驗檢測到t-PA的表達,其表達量約為1.1μg/10⁶細(xì)胞/天,與質(zhì)粒pctPA在COS7作瞬時表達時（轉(zhuǎn)染后48h）的水平相近。但在細(xì)胞傳代中無G418壓力時,t-P... 

【文章來源】：中國人民解放軍軍事科學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：104 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
英文縮略詞表
重組質(zhì)粒索引
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第二部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
第三部分
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
小結(jié)
參考文獻
文獻綜述
致謝



本文編號：3461286