許多研究結(jié)果表明堿性成纖維細胞生長因子（basic fibroblast growth factor，bFGF）直接與成骨細胞聯(lián)合植入體內(nèi)能明顯促進骨形成過程，這對臨床治療骨折、骨缺損、骨壞死等骨科疾病有一定的效果。但是bFGF在體內(nèi)易降解，因此bFGF和成骨細胞聯(lián)合植入時直接外源給予bFGF需反復(fù)多次注射，造成使用不方便、易感染，而且bFGF濃度不易控制，影響療效。因此本課題設(shè)計基因治療與骨組織工程學(xué)相結(jié)合的方法以改變外源性加入bFGF蛋白的不足之處，即將成骨細胞經(jīng)bFGF基因轉(zhuǎn)染后進行體外擴增，并進一步研究其體內(nèi)外成骨能力，得出如下結(jié)果： 應(yīng)用PCR技術(shù)從克隆載體PBR322-bFGF載體上擴增獲得bFGF cDNA基因，采用基因重組技術(shù)將bFGF cDNA克隆至真核表達載體pcDNA3.1和pEGFP-C3上。重組質(zhì)粒分別經(jīng)雙酶切、PCR分析及序列測定驗證了插入片段的正確性后，用脂質(zhì)體介導(dǎo)重組質(zhì)粒pcDNA3.1-bFGF和pEGFP-C3-bFGF轉(zhuǎn)染3T3細胞。熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染細胞的熒光表達情況，細胞爬片免疫組化以及細胞培養(yǎng)上清的ELISA檢測bFGF表達情況。結(jié)果表... 

【文章來源】：華南理工大學(xué)廣東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

制備組織工程產(chǎn)品的一般步驟〔引Fig.1一1ProeessofPreParationTissueEngineeringProduets

組織工程一樣即:種子細胞、生物載體材料以及調(diào)節(jié)信號因子。隨著細胞生物學(xué)、材料科學(xué)以及分子生物學(xué)的發(fā)展，骨組織工程學(xué)在種子細胞、材料支架、調(diào)節(jié)信號因子方面取得一定的進展。圖1一3是骨組織工程移植原理圖「，91:圖1一3骨組織工程體內(nèi)移植的原理圖Fig.1一3DiagramofPrineiPleofBoneTissueinvivotransPlant1.2.1種子細胞一一成骨細胞的研究現(xiàn)狀骨組織工程學(xué)研究中效應(yīng)細胞可用未分化間充質(zhì)細胞或成骨細胞，間充質(zhì)細胞為多功能分化潛能細胞，必須在BMP誘導(dǎo)下才能向成骨方向分化，而成骨細胞因其本身已有向成骨方向分化的潛能，故不用BMP誘導(dǎo);而且間充質(zhì)細胞主要來源于骨髓，成骨細胞來源于骨膜、骨組織，因為成年動物骨髓中間充質(zhì)細胞數(shù)量隨年齡的增大而明顯減少，故骨組織工程學(xué)研究常采用培養(yǎng)成骨細胞作為種子細胞〔2。〕。1.2.1.1成骨細胞的形態(tài)和生化特點在生長活躍的骨組織內(nèi)大致可分辨出四種細胞成分

圖1一5脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移原理圖〔10，，F(xiàn)ig.1一5PrineiPleofLIPosome一mediatedGeneTransefr響陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因的因素子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)基因的效率主要與陽離子脂質(zhì)體的組成、脂質(zhì)與基因

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3458884