本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用siRNA技術(shù)抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌LT基因表達(dá)的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的應(yīng)用小干擾RNA(siRNA)技術(shù)抑制產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)LT基因的表達(dá)。方法針對(duì)LT基因設(shè)計(jì)siRNAs序列,在ETEC培養(yǎng)過(guò)程中,將針對(duì)LT的siRNA、非特異性對(duì)照siRNA、陰性對(duì)照siRNA和LB培養(yǎng)基分別加入siRNA組(siRNA-LT1組、siRNA-LT2組)、siRNA-coa3組、siRNA-NC組和空白對(duì)照組,分3個(gè)時(shí)間點(diǎn)加入,每次1nmol。在首次加入siRNA后45min(A時(shí)間點(diǎn))、90min(B時(shí)間點(diǎn))、135min(C時(shí)間點(diǎn))留取菌液,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)5組LT mRNA的表達(dá)水平。應(yīng)用蛋白免疫印跡法(Western blot)檢測(cè)siRNA-LT1組、siRNA-LT2組和空白對(duì)照組在3個(gè)時(shí)間點(diǎn)的LT蛋白表達(dá)水平。結(jié)果實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,siRNA-LT1在A、B、C 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)LT mRNA表達(dá)的抑制率分別為70.9%、70.1%、72.5%,siRNA-LT2在A、B、C 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)LT mRNA表達(dá)的抑制率分別為70.1%、69.2%、70.5%,siRNALT1組、siRNA-LT2組對(duì)LT mRNA表達(dá)的抑制率與相應(yīng)處理時(shí)間的siRNA-NC組、siRNA-coa3組、空白對(duì)照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Western Blot結(jié)果顯示,siRNA-LT1和siRNA-LT2在A、B、C 3個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)LT蛋白表達(dá)的抑制率分別為43.1%、18.4%、5.0%和38.2%、15.4%、30.1%。結(jié)論針對(duì)LT基因設(shè)計(jì)合成的siRNA在體外能有效地抑制LT基因的表達(dá)。
【作者單位】： 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌 不耐熱腸毒素 小干擾RNA技術(shù) RNA干擾
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81460322) 云南省內(nèi)設(shè)研究機(jī)構(gòu)科技計(jì)劃項(xiàng)目(2011WS0048)
【分類(lèi)號(hào)】：R440
【正文快照】： 產(chǎn)腸毒素大腸桿菌(ETEC)是一種致病型的大腸埃希菌,全球每年因感染ETEC發(fā)生腹瀉的人數(shù)約為6.5億[1],在發(fā)展中國(guó)家,5歲以下兒童每年因感染ETEC發(fā)生腹瀉的人數(shù)約為2.1億,其中約有38萬(wàn)因該疾病死亡[2]。目前,臨床治療ETEC感染性腹瀉的主要方法是應(yīng)用抗菌藥物及補(bǔ)液。但隨著抗菌藥

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【相似文獻(xiàn)】

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