發(fā)布時間：2021-10-20 11:52

　　目的研究miR-124靶向鎂轉(zhuǎn)運蛋白1（MagT1）可否調(diào)控活化后T細胞功能耗竭。方法 1)分離外周血單個核細胞,用IFN-γ、IL-2、抗-CD3抗體、抗-CD28抗體和IL-1α活化T細胞;流式細胞儀檢測T細胞活化標記分子CD25和CD69所占的比例。2)構(gòu)建miR-124/miR-124 sponge慢病毒載體;包裝慢病毒后感染活化T細胞,用RT-qPCR檢測感染后T細胞內(nèi)miR-124和MagT1基因表達。3)生物信息學分析miR-124與MagT1的靶向位點,并用雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)鑒定。4)Western blot法檢測慢病毒感染前后T細胞MagT1和PD-1蛋白水平。5)CCK8法檢測慢病毒感染前后T細胞增殖能力;ELISA法檢測細胞T分泌細胞因子TNF-α和TGF-β的能力。結(jié)果流式細胞儀檢測表明T細胞活化成功。RT-qPCR檢測表明慢病毒構(gòu)建成功,miR-124/miR-124 sponge載體分別顯著上調(diào)或下調(diào)miR-124的表達（P<0.01）。雙熒光素酶報告基因系統(tǒng)證實miR-124靶向MagT1 3′UTR并抑制其表達。Western blot表明mi... 

【文章來源】：基礎醫(yī)學與臨床. 2019,39(10)CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 外周血單核細胞分離與T細胞的活化:
        1.2.2 流式細胞儀檢測T細胞的活化:
        1.2.3 慢病毒構(gòu)建和感染:
        1.2.4 RT-qPCR檢測感染后T細胞內(nèi)miR-124表達水平:
        1.2.5 雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng):
        1.2.6 Western blot檢測PD-1和MAGT1蛋白表達水平:
        1.2.7 CCK8法檢測各組T細胞增殖能力:
        1.2.8 ELISA法檢測各組T細胞分泌細胞因子TNF-α和TGF-β的能力:
    1.3 統(tǒng)計學分析
2 結(jié)果
    2.1 T細胞活化
    2.2 miR-124過表達和miR-124 sponge慢病毒感染后miR-124和MagT1 mRNA表達
    2.3 miR-124過表達和miR-124 sponge慢病毒感染后檢測活化后T細胞增殖能力
    2.4 檢測各組T細胞分泌細胞因子TNF-α和TGF-β的能力
    2.5 miR-124靶向MagT1 3′UTR調(diào)控MagT1基因
    2.6 miR-124調(diào)控MagT1蛋白表達及對耗竭性T細胞生物標志蛋白PD-1的影響
3 討論



本文編號：3446861