發(fā)布時間：2017-04-28 05:12

  本文關(guān)鍵詞：抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：丙肝病毒是一種正鏈RNA病毒,它是導致人類肝臟疾病的重要因素。在本文中,我們提出了一種新的抑制丙肝病毒復制和轉(zhuǎn)錄的方法,并構(gòu)建了核酸電化學傳感器進行了驗證。同時,基于這一傳感器的設計思路,我們又研制了可以快速、靈敏地檢測NF-кB分子的傳感器,為NF-кB的分析提供了一種新途徑。 1、抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究 在本章中,我們提出了一種新的抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄的方法。通過引入一段體外的RNA,使其和丙肝病毒的基因組二者與miR-122的堿基互補配對總數(shù)達到12個,從而激活Ago2蛋白的內(nèi)切酶活性,導致丙肝病毒基因組被切割,進而從其與Ago2蛋白和miR-122所形成的復合物中釋放出來。由于失去了Ago2蛋白和miR-122的保護作用,釋放出來的丙肝病毒基因組很容易被降解,因而有效地抑制了其復制和轉(zhuǎn)錄。為驗證Ago2蛋白被激活,以及丙肝病毒基因組被切割,我們構(gòu)建了一種電化學生物傳感器。該傳感器利用了S1核酸酶能夠水解DNA-RNA雜交鏈的單鏈部分這一特點進行構(gòu)建。通過該傳感器我們發(fā)現(xiàn)只有當體系中引入這段體外的RNA,Ago2蛋白才能被激活。因此,該研究為抑制丙肝病毒的復制和轉(zhuǎn)錄提供了新的思路,對于丙肝的治療將具有重要意義。2、基于核酸外切酶構(gòu)建的核酸電化學傳感器用于NF-кB的檢測 基于前述傳感器的設計思路,我們對這一核酸電化學傳感器進行了改進,以便用于NF-кB的快速檢測。首先,將G-四連體序列與NF-кB特異性識別序列相結(jié)合共同修飾在電極上,然后,采用另外一種核酸外切酶—λ核酸外切酶對DNA分子進行切割從而產(chǎn)生G-四連體,最后,借助G-四連體結(jié)合血紅素(hemin)所形成的復合物產(chǎn)生的電化學信號實現(xiàn)了NF-кB快速、靈敏、簡便的電化學分析。
【關(guān)鍵詞】：丙肝病毒 復制和轉(zhuǎn)錄 Ago2蛋白 核酸電化學生物傳感器 S1核酸酶 NF-κB G-四連體 λ核酸外切酶 血紅素
【學位授予單位】：南京大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.21
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 緒論11-35
• 1 抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄的研究背景11-16
• 1.1 丙肝病毒的結(jié)構(gòu)和基因組11-13
• 1.2 丙肝病毒的生命周期13-14
• 1.2.1 丙肝病毒的入侵13-14
• 1.2.2 丙肝病毒的復制、轉(zhuǎn)錄和翻譯14
• 1.3 抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄的研究進展14-16
• 2 電化學分析技術(shù)簡介16-24
• 2.1 電化學系統(tǒng)17-18
• 2.2 電化學方法18-22
• 2.2.1 循環(huán)伏安法19-20
• 2.2.2 差分脈沖伏安法20-21
• 2.2.3 交流阻抗法21-22
• 2.3 化學修飾電極22-24
• 3 電化學生物傳感器簡介24-28
• 3.1 生物傳感器24-25
• 3.2 電化學生物傳感器25-26
• 3.3 核酸電化學生物傳感器26
• 3.4 適體生物傳感器26-28
• 4 本論文的主要研究內(nèi)容28
• 5 參考文獻28-35
• 第一章 抑制丙肝病毒復制與轉(zhuǎn)錄新方法的研究35-46
• 1.1 引言35
• 1.2 實驗部分35-38
• 1.2.1 實驗試劑36
• 1.2.2 實驗儀器36-37
• 1.2.3 Ago2蛋白內(nèi)切酶活性的激活37
• 1.2.4 HCV的5'UTR在金電極表面的固定37-38
• 1.2.5 Ago2蛋白內(nèi)切酶活性的檢測38
• 1.2.6 電化學實驗38
• 1.3 實驗結(jié)果與討論38-44
• 1.3.1 Additional RNA激活Ago2蛋白的內(nèi)切酶活性38-39
• 1.3.2 電化學方法檢測切割后的HCV 5'UTR39-40
• 1.3.3 循環(huán)伏安法定性檢測切割后的HCV 5'UTR40-41
• 1.3.4 差分脈沖伏安法檢測切割后的HCV 5'UTR41-42
• 1.3.5 模擬切割作用以后HCV 5'UTR的電化學響應42-44
• 1.4 討論44
• 1.5 參考文獻44-46
• 第二章 基于核酸外切酶構(gòu)建的核酸電化學傳感器用于NF-κB的檢測46-57
• 2.1 引言46-48
• 2.2 實驗部分48-50
• 2.2.1 實驗試劑48-49
• 2.2.2 實驗儀器49
• 2.2.3 DNA分子在金電極表面的修飾49-50
• 2.2.4 NF-κB(p50)與DNA分子的結(jié)合以及λ外切酶的切割作用50
• 2.2.5 電化學實驗50
• 2.3 結(jié)果與討論50-55
• 2.3.1 傳感器的原理50-51
• 2.3.2 實驗各階段金電極表面的電化學表征51-52
• 2.3.3 循環(huán)伏安法定性檢測NF-κB52-53
• 2.3.4 差分脈沖伏安法檢測NF-κB53-54
• 2.3.5 不同濃度條件下NF-κB的檢測54-55
• 2.4 結(jié)論55
• 2.5 參考文獻55-57
• 附錄57-58
• 致謝58-59

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 陸曉軍,鞠q

本文編號：332179