發(fā)布時(shí)間：2021-08-03 19:43

　　研究背景和目的：銅綠假單胞菌(（Pseudomonas aeruginosa, PA）是常見(jiàn)的革蘭氏陰性條件致病菌,在臨床分離的非發(fā)酵病原菌中,PA檢出率高,危害著人類的健康與生命。在抗生素選擇壓力的脅迫下,耐藥基因水平轉(zhuǎn)移速度加快是導(dǎo)致今天細(xì)菌耐藥嚴(yán)峻局面的主要原因之一。已有研究證明Ti質(zhì)粒在根癌土壤桿菌接合轉(zhuǎn)移過(guò)程中受到群體感應(yīng)信號(hào)分子即酰基高絲氨酸內(nèi)酯（acylated homoserine lactones, HSL）的調(diào)控,然而,HSL對(duì)PA接合反應(yīng)的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。因此,本實(shí)驗(yàn)分三部分研究：1.通過(guò)繪制PAO1和PA-△lasⅠ/rhlⅠ的生長(zhǎng)曲線掌握細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。2.構(gòu)建能在銅綠假單胞菌（PA）與大腸埃希氏菌（E.coli）間進(jìn)行接合轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒。3.通過(guò)外源性加入HSL（3-oxo-C12-HSL、C4-HSL）,觀察HSL對(duì)E.coli與PA-△lasⅠ/rhlⅠ接合反應(yīng)的影響。方法：1.用分光光度計(jì)測(cè)定細(xì)菌懸液的光密度來(lái)推知菌液濃度,繪出生長(zhǎng)曲線。2.通過(guò)NCBI blastn程序分析質(zhì)粒pCVD442接合反應(yīng)起始序列oriT,PCR擴(kuò)增oriT后插入pMD18-T... 

【文章來(lái)源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：52 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
引言
第一部分 PA01和PA-△lasⅠ/rh1Ⅰ生長(zhǎng)曲線的比較
    1.1 材料
        1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        1.1.2 主要培養(yǎng)基及其配制
        1.1.3 主要儀器
        1.1.4 主要試劑
    1.2 方法
        1.2.1 培養(yǎng)
        1.2.2 編號(hào)
        1.2.3 接種
        1.2.4 生長(zhǎng)曲線測(cè)定
        1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    1.3 結(jié)果與分析
        1.3.1 結(jié)果
        1.3.2 繪制生長(zhǎng)曲線
    1.4 討論
第二部分 pUCP24T載體的構(gòu)建與性能分析
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與質(zhì)粒
        2.1.2 溶液的制備
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器
    2.2 方法
        2.2.1 oriT序列引物設(shè)計(jì)和PCR
        2.2.2 重組質(zhì)粒pMD18-oriT的構(gòu)建及鑒定
        2.2.3 重組質(zhì)粒pUCP24T的構(gòu)建及鑒定
        2.2.4 接合轉(zhuǎn)移
        2.2.5 重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性分析
        2.2.6 pUCP24T質(zhì)粒提取
        2.2.7 實(shí)驗(yàn)具體操作步驟
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 oriT序列比對(duì)分析及PCR擴(kuò)增pCVD442 oriT片段
        2.3.2 重組質(zhì)粒pMD18-oriT的構(gòu)建及鑒定
        2.3.3 重組質(zhì)粒pUCP24T的鑒定
        2.3.4 接合反應(yīng)
        2.3.5 重組質(zhì)粒pUCP24T遺傳穩(wěn)定性的測(cè)定
    2.4 討論
第三部分 HSL對(duì)PA-△lasⅠ/rh1Ⅰ接合反應(yīng)的影響
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與質(zhì)粒
        3.1.2 抗生素與培養(yǎng)基
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器
    3.2 方法
        3.2.1 配制HSL
        3.2.2 培養(yǎng)
        3.2.3 接合試驗(yàn)
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 lasⅠ/rh1Ⅰ基因突變對(duì)接合頻率的影響
        3.3.2 C4-HSL對(duì)接合頻率的影響
        3.3.3 3-oxo-C12-HSL對(duì)接合頻率的影響
        3.3.4 混合3-oxo-C12-HSL、C4-HSL對(duì)接合頻率的影響
    3.4 討論
結(jié)語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
附錄
綜述
    參考文獻(xiàn)
在校期間發(fā)表論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3320218