本文關(guān)鍵詞：自制無血清培養(yǎng)體系長期培養(yǎng)對hESCs“干性”維持和notch1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的： 觀察本實驗室自制無血清培養(yǎng)基持續(xù)培養(yǎng)擴增hESCs對其“干性”的維持以及Notch1的表達變化趨勢，以探討該培養(yǎng)體系長時間培養(yǎng)擴增hESCs的效果以及Notch信號激活在維持hESCs“干性”中的作用。 方法： 收集自制無血清培養(yǎng)基傳代擴增至第20代、30代的hESCs；應(yīng)用免疫熒光染色法檢測兩代hESCs特異性標志OCT4、Nanog、SSEA-4的表達；堿性磷酸酶顯色法檢測兩代hESCs堿性磷酸酶活性；體外接種hESCs至免疫缺陷小鼠，觀察畸胎瘤形成，并行組織切片觀察內(nèi)、中、外三個胚層形成；應(yīng)用Real-timePCR、Western-bolt技術(shù)，比較Notch1信號分子在兩代細胞組分的表達情況，進行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： （1）免疫熒光染色法結(jié)果：兩代hESCs細胞均表達OCT4、Nanog、SSEA-4，呈強陽性反應(yīng)； （2）堿性磷酸酶顯色結(jié)果示：顯微鏡下觀察兩代hESCs細胞均被染成藍紫色，呈強陽性反應(yīng)； （3）免疫缺陷小鼠畸胎瘤切片可見：分別注射了兩代hESCs的小鼠形成的畸胎瘤切片染色提示均有內(nèi)胚層、中胚層、外胚層組織的形成。 （4）Real-time PCR技術(shù)比較Notch1基因在兩代細胞中的表達情況：hESCs的Notch1基因表達第30代是20代的（8.4±0.23）倍，p0.05。 （5）Western-bolt技術(shù)比較Notch1蛋白在兩代細胞中的表達情況：第30代hESCs的Notch1蛋白300kd片段相對表達量為（0.17±0.013），第20代為（0.016±0.002），，第30代hESCs的Notch1蛋白120kd片段相對表達量為（0.41±0.021），第20代為（0.36±0.018），第30代hESCs的Notch1蛋白總表達水平明顯高于第20代hESCs（p0.05）。 結(jié)論： （1）自制無血清無飼養(yǎng)層培養(yǎng)基能持續(xù)培養(yǎng)hESCs并維持其干性不變； （2）hESCs持續(xù)傳代后，Notch1信號分子呈較高的表達狀態(tài)，提示本無血清培養(yǎng)系統(tǒng)中hESCs在體外“干性”的維持可能與Notch信號激活有關(guān)，有待進一步研究。
【關(guān)鍵詞】：人胚胎干細胞 無血清培養(yǎng)基 無飼養(yǎng)層 Notch
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞對照表9-10
• 第1章 引言10-12
• 第2章 材料與方法-實驗材料12-24
• 2.1 細胞系12
• 2.2 實驗動物12
• 2.3 基本材料12
• 2.4 主要實驗試劑12-13
• 2.5 主要實驗儀器13-14
• 2.6 部分主要試劑配制14-16
• 2.7 hESCs 的培養(yǎng)16-18
• 2.7.1 hESCs 的復蘇16-17
• 2.7.2 hESCs 的日常培養(yǎng)和換液17
• 2.7.3 hESCs 的傳代17
• 2.7.4 hESCs 的凍存17-18
• 2.8 實驗分組及步驟18-23
• 2.8.1 hESCs 干性鑒定18-19
• 2.8.2 Notch1 在兩代細胞中的表達情況：19-23
• 2.9 統(tǒng)計學方法23-24
• 第3章 實驗結(jié)果24-31
• 3.1 顯微鏡下觀察 hESCs 形態(tài)學特征24
• 3.2 堿性磷酸酶染色24-25
• 3.3 免疫熒光染色25-27
• 3.4 畸胎瘤組織切片觀察27
• 3.5 RNA 純度及質(zhì)量27-28
• 3.6 Notch1 基因在各細胞組分的表達情況28-30
• 3.7 Notch1 蛋白在各細胞組分的表達情況：30-31
• 第4章 討論31-35
• 4.1 自制無血清培養(yǎng)體系中 hESCs 干性維持分析32-34
• 4.2 Notch1 表達變化與體外維持 hESCs 的“干性”潛在相關(guān)性分析34-35
• 第5章 結(jié)論與展望35-36
• 5.1 小結(jié)與結(jié)論35
• 5.2 展望35-36
• 致謝36-37
• 參考文獻37-40
• 攻讀學位期間的研究成果40-41
• 綜述41-47
• 參考文獻45-47

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 喻松霞;郭玲玲;賀文鳳;賀玲;李潔;李劍;;人胚胎干細胞無血清無飼養(yǎng)層培養(yǎng)體系的建立[J];基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床;2013年07期

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4 李劍;涂懷軍;石慶芝;李潔;吳瓊;戴革;戴育成;;臍血間充質(zhì)干細胞的無血清培養(yǎng)[J];中華血液學雜志;2006年06期

  本文關(guān)鍵詞：自制無血清培養(yǎng)體系長期培養(yǎng)對hESCs“干性”維持和notch1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：330888