發(fā)布時(shí)間：2021-06-27 10:16

　　目的明確小非編碼RNA（microRNA,miR-20a-5p）對(duì)結(jié)核分枝桿菌（MTB）誘導(dǎo)人巨噬細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控作用。方法構(gòu)建可表達(dá)或抑制miR-20a-5p、轉(zhuǎn)染miR-20a-5p抑制劑（miR-20a-5p-inhibitor,簡(jiǎn)稱"miR-20a-5p-inh"）、作為慢病毒載體的陰性對(duì)照（LV1-NC）的慢病毒載體,由oligo-dT引物通過(guò)固相亞磷酰胺法合成莖環(huán)寡核苷酸,并克隆到含綠色熒光蛋白（GFP）的慢病毒載體pGLV3-GFP內(nèi),將構(gòu)建的miR-20a-5p、miR-20a-5 p-inh、LV1-NC轉(zhuǎn)染THP-1人巨噬細(xì)胞3 h,培養(yǎng)72 h后用流式細(xì)胞儀分選出GFP+THP-1細(xì)胞,并分別采用減毒MTB菌株（H37Ra）感染8 h和過(guò)氧化氫（H₂O₂）處理30 min兩種方法誘導(dǎo)。通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)測(cè)定細(xì)胞中線粒體相關(guān)抗凋亡基因Bcl-2,以及促凋亡基因Bax、Bim和Bad的轉(zhuǎn)錄水平。同時(shí),用蛋白免疫印跡法檢測(cè)細(xì)胞裂解物中相關(guān)蛋白的表達(dá)。結(jié)果慢病毒轉(zhuǎn)染細(xì)胞后,在無(wú)刺激的THP-1細(xì)胞中miR-20a-... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)防癆雜志. 2019,41(07)CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)


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