基因治療是一種為病人體細胞提供所需的基因物質(zhì),使其能夠產(chǎn)生糾正或調(diào)節(jié)疾病的特異性蛋白的方法。近年來,越來越多的基因治療研究已經(jīng)在基礎(chǔ)研究和臨床研究方面取得巨大的進展。這些研究進展使基因治療有希望成為治療遺傳或后天疾�。ㄈ缧难懿『桶┌Y等）的有效手段。 自從科學(xué)家成功完成人類基因組序列圖后,基因治療從治療基因的克隆研究轉(zhuǎn)移到了基因傳遞的研究。在基因治療領(lǐng)域中,基因傳遞系統(tǒng)被用來將編碼治療蛋白序列的外源DNA引入到靶向細胞內(nèi),使之得到有效表達。目前已經(jīng)發(fā)展了幾種基因傳遞系統(tǒng)來促進體外或體內(nèi)的基因表達。其中,病毒載體轉(zhuǎn)染效率高,被用于首例人類基因治療實驗。然而,病毒載體的安全隱患（包括免疫原反應(yīng)以及病毒自我復(fù)制的風險）和復(fù)雜昂貴的制備過程都限制了病毒載體的使用。這些不足促使人們致力于發(fā)展非病毒基因傳遞系統(tǒng),如陽離子脂質(zhì)體,聚合物及其它機械或電子相關(guān)的基因傳遞系統(tǒng)。在非病毒基因傳遞系統(tǒng)中,新型的生物相容的高分子基因載體得到了越來越多的關(guān)注。 盡管高分子基因載體在安全,免疫原反應(yīng)和突變方面優(yōu)越于病毒載體,但通常高分子基因載體的細胞毒性較高,轉(zhuǎn)染效率較低。高分子載體用于基因治療的主要限... 

【文章來源】：武漢大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

陽離子高分子將DNA緊密復(fù)合成棒狀、環(huán)狀、球狀的復(fù)合物粒子，然后通過胞吞作用進入細胞膜，在細胞內(nèi)傳遞的一般過程

緩沖溶液PBS7.4中混合，室溫下放置0.sh后，形成不同N/P比的樹形分子/pNDA復(fù)合物(N/P比值是指樹形分子中帶正電的伯氨基與pDNA中帶負電的磷酸醋基的摩爾比值)，將此混合物進行凝膠電泳。圖3顯示了隨著NP/比值的增加，各代樹形分子/pDNA復(fù)合物的凝膠電泳結(jié)果。當N/P比值小于1時，聚陽離子樹形分子G4，G5或G6與聚陰離子DNA通過靜電相互作用形成復(fù)合物，ONA的負電荷部分被中和，但是尚有部分游離DNA在外加電場作用下產(chǎn)生位移;一且N滬比值大于或等于l，質(zhì)粒DNA在凝膠上的位移被完全抑制。而G7或GS在N/P比值為0.75時就能抑制質(zhì)粒DNA在凝膠上的位移。

形分子與質(zhì)粒DNA在PBS7.4中形成不同NP/比值的復(fù)合物，在無血清的DMEM培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)染細胞4小時，細胞持續(xù)培養(yǎng)44小時后，測定細胞中表達的熒光素酶的活性。如圖7所示，各代樹形分子G4一GS/pONA復(fù)合物介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染效率很大程度上依賴于代數(shù)，并遵循G6>G7>GS>GS)G4的次序。在HeLa細胞中，G6介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染效率隨著N/P比值增加而增加，在N/P為20時達到接近于市售的枝化尸EI的轉(zhuǎn)染效


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