本文關(guān)鍵詞：TERT在小鼠卵母細胞和原核期胚胎玻璃化冷凍前后表達變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景 世界首例冷凍胚胎成功妊娠分娩報道于二十世紀八十年代,目前冷凍-復(fù)蘇胚胎已經(jīng)成為常見的輔助生殖衍生技術(shù),配子以及原核期、卵裂期和囊胚期胚胎的有效冷凍保存方法也在不斷的探索中。 玻璃化冷凍(vitrification)技術(shù)的基本原理是將高濃度的冷凍保護劑在超低溫環(huán)境下凝固,形成不規(guī)則的玻璃化樣固體,保存了液態(tài)時正常分子和離子分布,因而在細胞內(nèi)發(fā)生玻璃化時能起到保護作用,避免冰晶的產(chǎn)生對胚胎造成傷害。雖然玻璃化冷凍相比較慢速冷凍顯著改善了人類配子和不同時期胚胎低溫貯藏的復(fù)蘇率、存活率和妊娠率,成為臨床更可靠的冷凍方法,甚至被運用在高難度的卵子、卵巢組織和人類胚胎干細胞的冷凍上,但仍不可避免的會發(fā)生冷凍損傷。冷凍損傷主要包括紡錘體和染色體異常,透明帶變硬,細胞膜損害,超微結(jié)構(gòu)損傷如線粒體異常等,以及其他可導(dǎo)致細胞死亡的改變,如DNA損傷,mRNA水平的改變和蛋白功能異常等,這些結(jié)構(gòu)和功能的損傷常造成嚴重后果,但可能不會在解凍復(fù)蘇時立即表現(xiàn)出來。端粒酶(telomerase)是由端粒RNA和端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)兩個亞基組成的核酸蛋白復(fù)合物。其中,TERT是端粒酶活性的必需和限速成分,其水平?jīng)Q定細胞端粒酶的活性。TERT能以自身RNA為模板反轉(zhuǎn)錄合成端粒DNA序列,并引導(dǎo)端粒添加到染色體的尾端,對維持染色體的長度、調(diào)節(jié)細胞增殖和凋亡起重要作用。成熟體細胞的端粒酶活性缺乏或者極低,而在腫瘤細胞和生殖細胞中端粒酶活性較高,這種較高的活性可以保證細胞處于高度的活性狀態(tài)。研究證明TERT對端粒長度的調(diào)節(jié)發(fā)生在轉(zhuǎn)錄水平上,人TERT沉默受表觀遺傳控制。端粒和端粒酶在動物生殖細胞受精和早期卵裂中發(fā)揮的重要作用。端粒酶缺陷模型小鼠的后代表現(xiàn)為進行性的組織器官增殖缺陷和生育力低下。 目的 分別測定成熟卵母細胞和原核期胚胎TERT mRNA表達量,對比玻璃化冷凍前后TERT mRNA表達水平的變化,初步探討不同階段卵子冷凍耐受性差異的原因,為人類卵子冷凍損傷機制和卵子庫建立提供研究基礎(chǔ)。 材料和方法 采用河南省動物中心8-12周昆明系小鼠,尿促性素(HMG)10IU/只后48小時注射人絨促性素(HCG)10IU/只,部分成熟卵子行體外受精(IVF)以獲取原核期胚胎。實驗組分為新鮮MII組,凍融MII組,新鮮合子組和凍融合子組。采用玻璃化冷凍保存MII卵子和原核期胚胎7-10天,分別PCR測定新鮮組和冷凍復(fù)蘇組各種生殖細胞內(nèi)TERT的mRNA表達水平,進行3次獨立重復(fù)實驗,采用SPSS12.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,并行TERT抗體熒光染色。 結(jié)果 1.小鼠新鮮MII卵和原核期胚胎熒光免疫染色均見TERT蛋白胞漿陽性表達。獲得新鮮MII卵157枚,原核期胚胎133枚,原核期胚胎TERT含量略低于MII期卵母細胞,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。 2.獲得凍融MII卵118枚(復(fù)蘇存活率71.5%),其TERT含量略低于新鮮MII期卵母細胞,但無統(tǒng)計學差異(P0.05)。 3.獲得凍融原核期胚胎121枚(復(fù)蘇存活率87.7%),其TERT含量略低于新鮮原核期胚胎,但無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 結(jié)論 1.小鼠成熟卵母細胞和原核期胚胎均表達端粒酶活性。 2.原核期胚胎端粒酶活性稍低于成熟卵母細胞,但無顯著性差異。 3.玻璃化冷凍后,小鼠成熟卵母細胞和原核期胚胎端粒酶活性均有降低趨勢,但無顯著性差異。 4.玻璃化冷凍復(fù)蘇可能不影響小鼠成熟卵母細胞和原核期胚胎端粒酶活性的mRNA水平表達。
【關(guān)鍵詞】：端粒酶 端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT) 玻璃化冷凍 成熟卵母細胞 原核期胚胎
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R321.1
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 英文~.略詞（Abbreviations)11-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-21
• 結(jié)果21-24
• 討論24-32
• 結(jié)論32-33
• 參考文獻33-38
• 綜述38-49
• 參考文獻45-49
• 個人簡歷49
• 攻讀碩士學位期間發(fā)表的文章49-50
• 致謝50

【參考文獻】

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1 金海霞,孫瑩璞,辛志敏,蘇迎春,郭藝紅;不同冷凍法對小鼠未成熟與成熟卵母細胞的成熟及胚胎發(fā)育的影響[J];中華婦產(chǎn)科雜志;2005年07期

  本文關(guān)鍵詞：TERT在小鼠卵母細胞和原核期胚胎玻璃化冷凍前后表達變化的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：323443