ATF6腺病毒的構(gòu)建及對軟骨細(xì)胞凋亡的研究
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【摘要】:目的 構(gòu)建攜人ATF6基因的重組腺病毒Ad-ATF6和siATF6,并探討其對軟骨細(xì)胞凋亡的影響。為進(jìn)一步研究ATF6基因的生物學(xué)功能奠定基礎(chǔ),為與ERS相關(guān)的軟骨發(fā)育疾病提供一定的參考價值。 方法 利用AdEasy TM腺病毒載體系統(tǒng),構(gòu)建重組腺病毒Ad-ATF6和siATF6,RT-PCR和Western blot在軟骨細(xì)胞ATDC5中檢測感染效果。Ad-ATF6分別感染軟骨細(xì)胞ATDC5和C28I2,F(xiàn)CM檢測細(xì)胞的增殖和凋亡;siATF6感染經(jīng)TM處理的SW1353細(xì)胞,F(xiàn)CM、MTT和Westernblot檢測ERS時細(xì)胞的凋亡情況;BMP2誘導(dǎo)ATDC5和C3H10T1/2細(xì)胞分化過程中,用Ad-ATF6和siATF6感染細(xì)胞,F(xiàn)CM、免疫組化、TUNEL和Western blot等檢測軟骨細(xì)胞分化過程中的凋亡情況。 結(jié)果 成功獲得高滴度的重組腺病毒Ad-ATF6和siATF6;Ad-ATF6處理組的ATDC5細(xì)胞和C28I2細(xì)胞凋亡率明顯增加(P0.05)、增殖率明顯降低(P0.05);TM+siATF6處理組SW1353細(xì)胞凋亡率明顯高于TM+Ad-ATF6處理組(P0.05);BMP2誘導(dǎo)ATDC5和C3H10T1/2細(xì)胞及骨組織分化過程中,Ad-ATF6處理組凋亡明顯高于siATF6處理組(P0.05)。 結(jié)論 非ERS狀態(tài)下,,過量的ATF6會誘導(dǎo)軟骨細(xì)胞的凋亡,抑制其增殖;ERS狀態(tài)下,ATF6能夠幫助細(xì)胞恢復(fù)正常狀態(tài),抑制細(xì)胞的凋亡,促進(jìn)其增殖;BMP2誘導(dǎo)軟骨分化過程中,ATF6能夠促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的凋亡。
【關(guān)鍵詞】:ATF6 重組腺病毒 軟骨細(xì)胞 凋亡
【學(xué)位授予單位】:重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2014
【分類號】:R373
【目錄】:
- 英漢縮略詞名詞對照5-7
- 摘要7-9
- ABSTRACT9-11
- 前言11-12
- 第一部分 Ad-ATF6 腺病毒的構(gòu)建和鑒定12-22
- 1 材料與方法12-19
- 2 結(jié)果19-21
- 3 小結(jié)21-22
- 第二部分 siATF6 腺病毒的構(gòu)建與鑒定22-27
- 1 材料與方法22-24
- 2 結(jié)果24-26
- 3 小結(jié)26-27
- 第三部分 ATF6 對軟骨細(xì)胞凋亡的研究27-35
- 1 材料與方法27-29
- 2 結(jié)果29-33
- 3 小結(jié)33-35
- 第四部分 ATF6 對軟骨分化過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)凋亡的研究35-44
- 1 材料與方法35-38
- 2 結(jié)果38-42
- 3 小結(jié)42-44
- 全文總結(jié)44-45
- 參考文獻(xiàn)45-47
- 文獻(xiàn)綜述47-54
- 參考文獻(xiàn)50-54
- 致謝54-55
- 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
【相似文獻(xiàn)】
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8 趙U
本文編號:315295
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