本文關(guān)鍵詞：抗菌肽attacin在家蠅胚胎細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：以家蠅抗菌肽attacin為目標(biāo)基因，用自行建立的家蠅胚胎細(xì)胞系（MDEC-07114）及含有桿狀病毒穿梭載體的Bacmid構(gòu)建家蠅胚胎細(xì)胞真核表達(dá)系統(tǒng)，對表達(dá)產(chǎn)物抗菌肽attacin進(jìn)行抗菌、熱穩(wěn)定性等生物學(xué)活性研究。 方法：1、全基因合成家蠅抗菌肽attacin，，將目的基因attacin克隆入PUC57質(zhì)粒，重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切后連接到pFastBacTMHTA供體質(zhì)粒，制備重組桿狀病毒BacmidDNA；2、重組桿狀病毒Bacmid DNA轉(zhuǎn)染家蠅胚胎細(xì)胞MDEC-07114，提取培養(yǎng)上清和細(xì)胞裂解物粗蛋白，SDS-PAGE檢測目的蛋白，鎳柱純化粗蛋白；3、SDS-PAGE和Western-Blot檢測、鑒定蛋白表達(dá)情況；4、表達(dá)產(chǎn)物生物學(xué)活性檢測：對革蘭氏陰性菌（大腸桿菌）和革蘭氏陽性菌（金黃葡萄球菌、枯草芽孢桿菌）的抑制作用；經(jīng)60-100℃水浴1-30min的熱穩(wěn)定性；經(jīng)pH5.0-10.0的酸堿作用后的耐受性。結(jié)果：1、成功構(gòu)建含家蠅抗菌肽attacin基因的桿狀病毒表達(dá)載體（Bacmid-pFastBacTM-attacin）；2、重組桿狀病毒Bacmid DNA成功轉(zhuǎn)染家蠅胚胎細(xì)胞，細(xì)胞出現(xiàn)直徑變大、停止生長、分離等現(xiàn)象；3、經(jīng)SDS-PAGE檢測培養(yǎng)上清和細(xì)胞裂解物粗蛋白均含有分子量為24KD的目的蛋白；4、鎳柱純化粗蛋白后經(jīng)SDS-PAGE和Western-Blot檢測證實(shí)含目的蛋白；5、生物學(xué)活性檢測：表達(dá)產(chǎn)物抗菌肽attacin可抑制大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌活性；經(jīng)60-100℃水浴1-30min及pH5.0-10.0酸堿作用后抗菌肽對大腸桿菌的抑菌活性影響不明顯。 結(jié)論：家蠅胚胎細(xì)胞MDEC-07114可用于桿狀病毒-真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)抗菌肽attacin；表達(dá)產(chǎn)物抗菌肽attacin具有生物學(xué)活性。
【關(guān)鍵詞】：抗菌肽 attacin 家蠅胚胎細(xì)胞 表達(dá) 生物學(xué)活性
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q78;R384.2
【目錄】：

• 英漢縮略詞對照表4-5
• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料與方法10-23
• 結(jié)果23-35
• 討論35-39
• 結(jié)論39
• 參考文獻(xiàn)39-42
• 綜述：家蠅抗菌肽及其基因工程研究進(jìn)展42-52
• 參考文獻(xiàn)49-52
• 致謝52-53
• 作者簡介53-54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊陽;孫紅瑜;金光耀;楊嬌;;抗菌肽的作用機(jī)理及應(yīng)用前景[J];中國林副特產(chǎn);2010年01期

2 盧艷敏;崔海信;王承民;何宏軒;;抗菌肽Magainin Ⅱ的原核表達(dá)與抗菌活性分析[J];河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2011年05期

3 唐勇;;抗菌肽基因表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展[J];飼料工業(yè);2009年07期

4 羅振華;吳建偉;付萍;國果;姜珊;;人工合成家蠅抗真菌肽MAF-1A對白色念珠菌致病性的影響[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年20期

5 金豐良;張呈文;許小霞;孫強(qiáng);任順祥;;死亡素與泛素在大腸桿菌中的高效融合表達(dá)[J];昆蟲學(xué)報(bào);2009年05期

6 王芙蓉;艾輝;雷朝亮;黃文;;家蠅幼蟲組織勻漿液的抗病毒活性[J];昆蟲知識;2006年01期

7 賀莉芳;萬啟惠;劉暉;張曦;閻玉濤;;家蠅胚胎細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性[J];昆蟲知識;2009年05期

8 仇妍虹;李鵬;李斐;鄭其升;曹瑞兵;周斌;陳德勝;陳溥言;;重組家蠅抗菌肽Des-HF在酵母中的表達(dá)及對金黃色葡萄球菌的抗菌活性[J];南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年01期

9 趙昆;劉思國;王春來;宮強(qiáng);遲磊;劉建東;王勇;云孟克;劉慧芳;孫延鳴;;�？咕腂ac7-Bac5-βdefense串聯(lián)基因在昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)中的表達(dá)及其產(chǎn)物的活性分析[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2008年03期

10 盧丹;鄭立;王欣欣;王凡;唐婷;柳峰松;;家蠅Denfensin-1基因的克隆、誘導(dǎo)表達(dá)及啟動子活性分析[J];昆蟲學(xué)報(bào);2013年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 唐亞麗;家蠅抗菌肽的分離及對細(xì)菌壁膜和DNA的作用[D];江南大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：抗菌肽attacin在家蠅胚胎細(xì)胞的表達(dá)及生物學(xué)活性研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：307616