發(fā)布時(shí)間：2017-04-15 01:10

  本文關(guān)鍵詞：CD38對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2基因表達(dá)及功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的：炎癥是機(jī)體組織對(duì)損傷因子的一種防御性反應(yīng)。炎癥反應(yīng)參與了肥胖、動(dòng)脈粥樣硬化等多種代謝性疾病和心血管疾病的病理進(jìn)程，TLR家族基因在炎癥的發(fā)生發(fā)展中起著重要的作用，巨噬細(xì)胞及中性粒炎性細(xì)胞的浸潤，伴隨著大量炎性因子的分泌，從而促使泡沫細(xì)胞生成等過程與之密切相關(guān)。CD38具有雙功能酶活性，即ADPR (ADP-ribosyl)環(huán)化酶和水解酶活性。它可以將NAD+催生成cADPR，同時(shí)可以將cADPR降解成ADPR，其發(fā)揮酶活性區(qū)域?yàn)榘饨Y(jié)構(gòu)域。我們的前期結(jié)果顯示，CD38基因缺失可明顯增強(qiáng)小鼠巨噬細(xì)胞中TLR4的表達(dá)，同時(shí)顯著抑制TLR2的表達(dá)。本文旨在探討小鼠巨噬細(xì)胞中CD38對(duì)TLR2表達(dá)以及巨噬細(xì)胞功能的影響及其可能的分子機(jī)制，從而為進(jìn)一步闡明CD38在炎癥反應(yīng)中的作用及其機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.原代細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定：小鼠腹腔注射3ml4%硫膠質(zhì)促使巨噬細(xì)胞聚集，5天后收獲細(xì)胞并于孵箱體外培養(yǎng)2天，確認(rèn)基因型；2.檢測(cè)巨噬細(xì)胞TLR2的表達(dá)；3. TLR2啟動(dòng)子區(qū)核心序列的構(gòu)建及確定：設(shè)計(jì)TLR2上游區(qū)5kb至1kb的啟動(dòng)子區(qū)引物，將不同長度的片段分別構(gòu)建入pGL3載體中，轉(zhuǎn)染進(jìn)細(xì)胞，進(jìn)行雙熒光素酶活性測(cè)定;4.生物信息學(xué)分析：用公認(rèn)的信息數(shù)據(jù)庫MotifMap及UCGU進(jìn)行TLR2上游轉(zhuǎn)錄因子的預(yù)測(cè)和分析；5.核心區(qū)驗(yàn)證：使用等長度片段擴(kuò)增，進(jìn)行核心區(qū)突變與刪除，進(jìn)行雙熒光素酶活性測(cè)定。6.熒光定量RT-PCR技術(shù)分析CD38敲除后TLR2對(duì)炎癥因子的影響。 結(jié)果：1.原代分離并培養(yǎng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，鏡下觀察其形態(tài)、大小及聚散性與報(bào)道相符，確認(rèn)為巨噬細(xì)胞。2. CD38基因敲除的小鼠巨噬細(xì)胞中TLR2表達(dá)下降。3.信息數(shù)據(jù)庫MotifMap顯示TLR2啟動(dòng)子的核心序列為GGGANNNTCC。4.生物信息學(xué)預(yù)測(cè)CD38調(diào)控TLR2的可能的轉(zhuǎn)錄因子為NF-κB。5.實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證TLR2的上游轉(zhuǎn)錄因子確為NF-κB。6. TLR2基因抑制后，，下游炎癥因子Arg1和IL-10表達(dá)顯著升高； TNF-α和IL-1β表達(dá)受到抑制。 結(jié)論：CD38基因缺失可顯著抑制TLR2介導(dǎo)的抗炎性反應(yīng)，其機(jī)制可能與CD38基因缺失抑制NF-κB信號(hào)通路，從而阻遏TLR2基因的表達(dá)，進(jìn)而影響下游炎癥反應(yīng)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：CD38 TLR2 炎癥反應(yīng) 轉(zhuǎn)錄因子 巨噬細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R363
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 緒論11-16
• 1.1 巨噬細(xì)胞與炎癥反應(yīng)11-14
• 1.1.1 炎癥反應(yīng)的病理特征及臨床意義11
• 1.1.2 巨噬細(xì)胞在炎癥反應(yīng)中的作用11-13
• 1.1.3 巨噬細(xì)胞參與炎癥反應(yīng)的機(jī)制13-14
• 1.2 CD38 在炎癥反應(yīng)中的作用14
• 1.3 本研究目的及意義14-16
• 第2章 CD38 基因敲除對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞 TLR2 表達(dá)的影響16-24
• 2.1 引言16
• 2.2 材料和方法16-20
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物16
• 2.2.2 CD38 基因敲除小鼠的制備和鑒定16-17
• 2.2.3 巨噬細(xì)胞的原代培養(yǎng)及基因型鑒定17-19
• 2.2.4 CD38 基因敲除小鼠中 TLR2 表達(dá)水平的測(cè)定19-20
• 2.3 結(jié)果20-22
• 2.3.1 CD38 基因敲除小鼠基因型鑒定20
• 2.3.2 巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)及基因型鑒定20-21
• 2.3.3 CD38 敲除小鼠巨噬細(xì)胞中 TLR2 mRNA 水平表達(dá)下降21-22
• 2.4 討論22-24
• 第3章 巨噬細(xì)胞 TLR2 基因表達(dá)的可能調(diào)控機(jī)制24-39
• 3.1 引言24
• 3.2 材料和方法24-28
• 3.2.1 TLR2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控生物信息學(xué)預(yù)測(cè)24
• 3.2.2 TLR2 啟動(dòng)子不同長度片段及質(zhì)粒的構(gòu)建24-27
• 3.2.3 TLR2 啟動(dòng)子雙熒光素酶活性的測(cè)定27-28
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果28-37
• 3.3.1 TLR2 啟動(dòng)子雙熒光素酶報(bào)告載體的構(gòu)建28-31
• 3.3.2 TLR2 啟動(dòng)子區(qū)核心序列的確定31-34
• 3.3.3 TLR2 轉(zhuǎn)錄調(diào)控生物信息學(xué)預(yù)測(cè)結(jié)果34-36
• 3.3.4 TLR2 啟動(dòng)子區(qū)核心序列的驗(yàn)證36-37
• 3.4 討論37-39
• 第4章 CD38 缺失對(duì)巨噬細(xì)胞 TLR2 介導(dǎo)的信號(hào)通路的影響及其調(diào)控機(jī)制39-45
• 4.1 引言39
• 4.2 材料和方法39-40
• 4.2.1 巨噬細(xì)胞原代培養(yǎng)及基因型鑒定39
• 4.2.2 TLR2 對(duì)炎癥因子的影響39-40
• 4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果40-42
• 4.4 討論42-45
• 第5章 結(jié)論45-46
• 致謝46-47
• 參考文獻(xiàn)47-51
• 附錄51-53
• 綜述53-63
• 參考文獻(xiàn)59-63

【引證文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 方莉娜;烏司他丁對(duì)免疫抑制狀態(tài)下重癥肺部感染小鼠巨噬細(xì)胞分化的影響[D];桂林醫(yī)學(xué)院;2015年

  本文關(guān)鍵詞：CD38對(duì)巨噬細(xì)胞TLR2基因表達(dá)及功能的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：307254