目的人源肌酸激酶u Mt CK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,開發(fā)固定化u Mt CK酶法生成磷酸肌酸,實(shí)現(xiàn)其工業(yè)化應(yīng)用價(jià)值。方法將異源表達(dá)的u Mt CK固定在納米磁性材料Fe₃O₄@Histidine-Ni上,制備固定化酶Fe₃O₄@HistidineNi/uMtCK,并進(jìn)行催化反應(yīng)。與游離酶u MtCK比對(duì)酶學(xué)性質(zhì)和動(dòng)力學(xué)參數(shù),測(cè)定固定化酶Fe₃O₄@Histidine-Ni/u Mt CK的重復(fù)使用次數(shù)。結(jié)果與游離酶u Mt CK相比,固定化酶Fe₃O₄@HistidineNi/u Mt CK的最適反應(yīng)溫度提高5℃,最適p H降低0.5個(gè)單位,在50℃、pH 7.5下孵育2 h,殘余酶活為51%,而游離酶僅為27%;u Mt CK的KmCr為10.7mmol/L,為Fe₃O₄@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍; Fe₃O... 

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中國(guó)醫(yī)藥生物技術(shù)2019年8月第14卷第4期ChinMedBiotechnol,August2019,Vol.14,No.4305相對(duì)活性（%）Relativeactivity(%)1101009080706050403020相對(duì)活性（%）Relativeactivity(%)1008060402001020304050600.51.01.52.02.5溫度（℃）Temperature(℃)A時(shí)間（h）Time(h)B圖4溫度對(duì)uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的影響Figure4EffectsoftemperatureonuMtCKandFe3O4@Histidine-Ni/uMtCK相對(duì)活性（%）Relativeactivity(%)1101009080706050403020相對(duì)活性（%）Relativeactivity(%)1008060402003456789100.51.01.52.02.5pHA時(shí)間（h）Time(h)B圖5pH對(duì)uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的影響Figure5EffectsofpHonuMtCKandFe3O4@Histidine-Ni/uMtCKFe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最適作用溫度為40℃，比uMtCK的最適反應(yīng)溫度高5℃。在50℃，pH7.5條件下測(cè)定uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的穩(wěn)定性，由圖4B結(jié)果顯示，固定化酶Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK孵育2h以后殘余51%的活性，而uMtCK僅殘余27%的活性。2.3.2pH對(duì)酶活性的影響在不同pH值（4.0、5.0、6.0、7.0、7.5、8.0和9.0）、40℃下測(cè)定uMtCK和Fe3O4@Histidine-Ni/uMtCK的活力，結(jié)果如圖5A所示，uMtCK的最適pH為7.5，F(xiàn)e3O4@Histidine-Ni/uMtCK的最適pH

pH對(duì)uMtCK和Fe3O4

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]人類線粒體肌酸激酶uMtCK的底物結(jié)合位點(diǎn)分析[J]. 孟浩毅,李丹陽(yáng),孫正陽(yáng),楊兆勇,張志斐,袁麗杰.  中國(guó)生物工程雜志. 2018(05)



本文編號(hào)：3057225