采用分子生物學(xué)與免疫學(xué)技術(shù),研究人源陽離子抗菌肽hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染對M1型巨噬細(xì)胞RAW264.7細(xì)胞活化功能的影響及其機(jī)理。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法將本實驗室已構(gòu)建的重組質(zhì)粒pcDNA4/Myc-His-LL-37瞬時轉(zhuǎn)染至RAW264.7細(xì)胞,RT-PCR法檢測其轉(zhuǎn)染情況;MTT法檢測RAW264.7細(xì)胞的增殖活性;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡變化;中性紅吞噬實驗檢測RAW264.7吞噬功能;RT-PCR法分析CD80、CD86與TLR及細(xì)胞因子的mRNA的表達(dá)。結(jié)果表明:hCAP-18/LL-37基因成功轉(zhuǎn)染RAW264.7細(xì)胞;hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染可促進(jìn)LPS處理的RAW264.7細(xì)胞的增殖活性;hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染后RAW264.7細(xì)胞未出現(xiàn)明顯的凋亡和細(xì)胞周期的改變;中性紅吞噬實驗結(jié)果表明: LPS處理的RAW264.7細(xì)胞吞噬功能與未處理組比較顯著增強(qiáng),經(jīng)LPS處理的重組載體轉(zhuǎn)染組與空載體轉(zhuǎn)染組比較吞噬功能增強(qiáng);RT-PCR結(jié)果表明:hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染可促進(jìn)RAW264.7細(xì)胞CD80和CD86的mRNA表達(dá),促... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MTT比色法檢測細(xì)胞的增殖活性Fig.2.3DetectionofcellproliferationindifferentgroupsbyMTTmethod24h48h72htime

cell 0.31±0.012**4 transfected cell 0.24±0.012ansfected cell 0.39±0.051*#sfected cell compared with LPS+ PcDNA4 transfected cell*ell compared with Untransfected cells control **P﹤0.05sfected cell compared with LL-37 transfected cell #P﹤0.05LL-37 基因轉(zhuǎn)染對 RAW264.7 細(xì)胞 CD80、CD8-1β 的 mRNA 表達(dá)的影響顯示:hCAP-18/LL-37基因轉(zhuǎn)染組與空載體轉(zhuǎn)染CD80、CD86 mRNA的表達(dá)均上調(diào)。經(jīng)過LPS（趨勢不大。1 2 3 4 5 6 7

RT-PCR 結(jié)果顯示：LPS 處理前后，重組載體轉(zhuǎn)染TLR4 的 mRNA 的表達(dá)上調(diào)。LR-4actin圖 2.11RT-PCR 檢測細(xì)胞 TLR4mRNA 的表達(dá).2.11 Detection the expression of TLR4 mRNA by R，TNF-α的RT-PCR結(jié)果顯示：hCAP-18/LL-37基轉(zhuǎn)染組比較IL-1β，TNF-α的mRNA表達(dá)都上調(diào)，理后，變化趨勢不大。1 2 3 4 5 6 71 2 3 4 5 6 7

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]昆蟲抗菌肽在醫(yī)藥上的應(yīng)用[J]. 黃自然,廖富蘋,鄭青,黃亞東.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2001(02)
[2]昆蟲抗菌肽的功能、作用機(jī)理與分子生物學(xué)研究最新進(jìn)展[J]. 趙東紅,戴祝英,周開亞.  生物工程進(jìn)展. 1999(05)
[3]人工合成殺菌肽shiva-1對人直腸癌細(xì)胞株的殺傷作用[J]. 張衛(wèi)民,黃自然,程挺干,彭朝暉.  中華消化雜志. 1998(05)



本文編號：3029928