本文關(guān)鍵詞：Bcl-3對HTLV-1感染細胞生長的影響及其作用機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景人類T細胞白血病1型病毒(HTLV-1)是一種感染CD4+、細胞和樹突狀細胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒,它是成人T細胞白血病(ATL)的病原體。HTLV-1的病毒蛋白Tax能夠利用多種細胞機制和信號途徑調(diào)節(jié)細胞性狀轉(zhuǎn)化和病毒復制,其中,Tax誘導NF-κB通路的持續(xù)激活被認為是導致ATL的主要原因。Bcl-3是IκB家族中的分子,它能夠促進或抑制NF-κB依賴的基因的轉(zhuǎn)錄；在很多HTLV-1感染細胞系和ATL細胞中均發(fā)現(xiàn)Bcl-3表達量增高,但Bcl-3在HTLV-1致病過程中的作用機制仍不明確。 目的研究在HTLV-1感染的細胞中沉默Bcl-3對細胞生長增殖,DNA損傷以及NF-κB活性的影響。 方法 1.RT-PCR與Western blot:培養(yǎng)MT2、Jurkat、IM9、THP-1、MT4五種細胞系,檢測Bcl-3mRNA與蛋白質(zhì)的表達量；在MT2細胞中轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA,檢測Bcl-3mRNA與蛋白質(zhì)的表達情況； 2.免疫熒光檢測：分別在Tax轉(zhuǎn)染的Jurkat細胞系以及持續(xù)表達Tax的TaxP細胞系中觀察Bcl-3與P65的核轉(zhuǎn)位情況； 3.彗星實驗：在MT2細胞中轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA,檢測其對細胞DNA損傷的影響； 4.MTT檢測：在MT2細胞中轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA質(zhì)粒,檢測其對細胞生長的影響； 5.熒光素酶活性檢測：將pNF-κB-luc質(zhì)粒與Bcl-3shRNA質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染[axN與TaxP細胞,觀察沉默Bcl-3對NF-κB活性的影響。結(jié)果 1.實時定量PCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)Bcl-3的mRNA及蛋白表達量在HTLV-1感染的細胞系高于HTLV-1未感染的細胞系； 2.免疫熒光發(fā)現(xiàn)在Tax持續(xù)表達的TaxP細胞中能觀察到P65的核轉(zhuǎn)移； 3.免疫熒光發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染Tax的Jurkat細胞中能觀察到Bcl-3表達及核轉(zhuǎn)移的增加； 4.實時定量PCR和Western blot檢測發(fā)現(xiàn)在MT2細胞中,Bcl-3shRNA能夠在mRNA水平及蛋白水平顯著抑制Bcl-3表達； 5.MTT法檢測到在HTLV-1感染的細胞系轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA能夠抑制細胞生長； 6.彗星實驗檢測到在HTLV-1感染的細胞系轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA能夠引起細胞DNA損傷； 7.熒光素酶報告檢測法檢測到在HTLV-1感染的細胞系轉(zhuǎn)染Bcl-3shRNA能夠抑制NF-κB的活性。 結(jié)論 在HTLV-1感染細胞中沉默Bcl-3可抑制細胞生長、誘導DNA損傷。
【關(guān)鍵詞】：HTLV-1 Bcl-3 DNA損傷 NF-κB激活
【學位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-12
• 1 實驗材料12-15
• 2 實驗方法15-25
• 3 實驗結(jié)果25-27
• 4 討論27-29
• 小結(jié)29-30
• 附圖30-34
• 參考文獻34-38
• 綜述38-47
• 參考文獻43-47
• 附錄47-48
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況48-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Ruaidhrí J. Carmody;;Nuclear Factor-κB:Activation and Regulation during Toll-Like Receptor Signaling[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年01期

  本文關(guān)鍵詞：Bcl-3對HTLV-1感染細胞生長的影響及其作用機制，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：302823