發(fā)布時(shí)間：2021-01-30 09:48

　　為了克服鼠源性單克隆抗體應(yīng)用于人體時(shí)所出現(xiàn)的嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)，人源化抗體應(yīng)運(yùn)而生，并很快成為十余年來(lái)國(guó)內(nèi)外生物醫(yī)學(xué)研究的重大熱點(diǎn)之一。12F6是我所自制的抗人CD3的小鼠單克隆抗體，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)它競(jìng)爭(zhēng)抑制OKT3、SK7及UCHT1等CD3單抗與抗原的結(jié)合并具有與OKT3相似的激活及抑制T細(xì)胞的功能，提示12F6有可能作為免疫抑制劑應(yīng)用于急性移植排斥反應(yīng)的治療。但作為小鼠雜交瘤技術(shù)生產(chǎn)的抗體，12F6同OKT3一樣存在鼠源抗體應(yīng)用于人體時(shí)可能產(chǎn)生的一系列問(wèn)題。因此，我們計(jì)劃對(duì)12F6進(jìn)行人源化改造，期望獲得一個(gè)即保留高親和力，免疫原性又大大下降的人源化抗體。首先采用5’RACE技術(shù)獲得了12F6的可變區(qū)全長(zhǎng)序列，在確定了12F6可變區(qū)中CDR區(qū)和FR區(qū)的范圍之后，我們將CDR區(qū)直接移植到人源抗體模板的FR中，將獲得的人源化輕、重鏈抗體基因克隆到表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染COS細(xì)胞，用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定其抗原結(jié)合活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)這個(gè)人源化抗體的親和力基本完全喪失。為了重建人源化抗體的親和力，我們對(duì)可能影響抗體親和力的FR區(qū)重要?dú)埢M(jìn)行回復(fù)突變分析。經(jīng)過(guò)活性篩選，我們發(fā)現(xiàn)對(duì)于人源化重鏈來(lái)說(shuō)，框架區(qū)殘基6，23，24... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抗人CD3單抗12F6可變區(qū)基因的克隆
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4. 討論
第二部分 12F6人源化抗體的表達(dá)與篩選
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4. 討論
第三部分 12F6人源化抗體的生物學(xué)功能檢測(cè)
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
    3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4. 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
縮略詞
綜述
致謝



本文編號(hào)：3008687