本文關(guān)鍵詞：細胞色素P450氧化還原酶基因多態(tài)性對其mRNA及活性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景 細胞色素P450氧化還原酶(Cytochrome P450oxidoreductase, POR)是存在于人肝微粒體中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上的一種黃素蛋白質(zhì)。它傳遞電子給所有的微粒體細胞色素P450酶,進而實現(xiàn)個體對藥物、致癌物等的代謝作用。目前還沒有正常肝功能的中國人肝樣本POR的詳細報道。 目的 本研究檢測POR基因多態(tài)性、POR mRNA表達水平及POR活性,并分析POR基因多態(tài)性對POR mRNA表達水平及POR活性的影響。分析POR mRNA表達水平與POR活性的相關(guān)性及POR基因多態(tài)性對POR mRNA與POR活性相關(guān)性的影響。另外,分析人口學因素對POR mRNA、POR活性及兩者相關(guān)性的影響,提供POR的生理數(shù)據(jù)。 方法 POR基因多態(tài)性通過SnapShort進行分型分析。POR活性通過測定人肝微粒體中細胞色素C的還原來檢測。POR mRNA表達水平通過熒光定量PCR方法測定,并以2-△Ct計算擴增結(jié)果。 結(jié)果 123例人肝樣本POR基因8種SNP位點分型結(jié)果顯示：POR基因SNP位點(rs17148944GA、rs2302433CT、rs1057868CT、rs41301394CT rs1135612AG、rs10954732GA、rs4732515TC、rs4732516CG)突變率分別為0.8%、6.9%、34.1%、34.1%、48.8%、50.8%、86.2%、86.2%。本研究樣本中POR mRNA表達水平為0.047-1.25,差異26.6倍,中位數(shù)是0.28。125例正常肝功能的中國人每毫克微粒體中POR活性水平為26.91-125.77nmol/mg protein/min,差異4.67倍,其中位數(shù)為56.05nmol/mg protein/mki。另外,125例正常肝功能的中國人每克肝組織中POR活性水平為215-12323nmol/g liver/min,差異57.23倍,其中位數(shù)為2152nmol/g liver/min。 通過兩種方法分析POR基因多態(tài)性分別對POR mRNA及POR活性的影響。首先,逐一分析POR基因單核苷酸多態(tài)性(SNP)對POR活性的影響,沒有發(fā)現(xiàn)明顯影響(P0.05)。然后,根據(jù)8種SNP,對POR基因進行單倍型分析,將123例樣本分為14種單倍型,分析兩兩單倍型間的人肝中POR活性的差異性。結(jié)果顯示：以每毫克微粒體為單位表示POR活性時,單倍型7(n=7)和單倍型8(n=8)相比,有4個SNP不同(rs1057868、rs41301394、rs4732515、rs4732516),導(dǎo)致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有顯著差異(P=0.008)。單倍型1(n=24)與單倍型7(n=7)相比,有4個SNP不同(rs157868、rs10954732、 rs1135612、rs41301394),導(dǎo)致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.011)。單倍型8(n=8)和單倍型10(n=36)相比,有3個SNP不同(rs1135612、rs4732515、rs4732516),導(dǎo)致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.015)。單倍型10(n=36)與單倍型1(n=24)相比,有4個SNP不同(rs1057868、rs10954732、rs1135612、rs41301394),導(dǎo)致兩種單倍型樣本間每毫克微粒體中POR活性有明顯差異(P=0.028)。同樣,單倍型6與單倍型11,單倍型8與單倍型11,單倍型1與單倍型11,單倍型6與單倍型8等兩兩基因型間每毫克微粒體中POR活性相比時,都表現(xiàn)出明顯差異(P0.05)。而以每克肝組織為單位表示POR活性時,只發(fā)現(xiàn)單倍型7(n=7)分別與單倍型1(n=24)、單倍型6(n=6)相比時,每克肝組織中POR活性有明顯差異(P0.05)。同樣分析14種單倍型樣本兩兩間POR mRNA表達水平的差異性。結(jié)果顯示：單倍型3分別與單倍型1、單倍型7、單倍型8、單倍型10相比時,POR mRNA表達水平具有明顯差異(P0.05)。 另外,分析POR mRNA與POR活性的總相關(guān)性,并分析POR基因多態(tài)性對POR mRNA與POR活性相關(guān)性的影響。結(jié)果顯示：POR基因rs1057868位的基因型為TT純合子突變的樣本(n=11), POR mRNA與POR活性明顯相關(guān)(r=0.675, P=0.023)。POR基因rs41301394位的基因型為TT純合子突變的受試者(n=11), POR mRNA與POR活性明顯相關(guān)(r=0.675,P=0.023)。單倍型8(rs1057868-rs4732516:TC-G-A-G-C-CT-TC-CG)(n=6)的POR mRNA與POR活性明顯相關(guān)(r=0.885,P=0.019)。 人口學因素分析結(jié)果顯示,年齡、性別對POR活性沒有明顯影響,吸煙(P=0.044)和飲酒(P=0.013)明顯降低POR活性。而年齡、性別、吸煙、飲酒對POR mRNA表達水平均沒有影響。男性的POR mRNA表達水平與POR活性明顯相關(guān)(r=0.384,P=0.036),吸煙的樣本POR mRNA表達水平與POR活性明顯相關(guān)(r=0.658,P=0.028)。 結(jié)論 1.POR基因突變明顯影響POR mRNA表達水平及POR活性。 2.吸煙和飲酒明顯降低POR活性。 3.POR mRNA表達水平與POR活性總體沒有明顯相關(guān)性。 4.男性的PORmRNA表達水平與POR活性明顯相關(guān)(r=0.384,P=0.036)。吸煙者的PORmRNA表達水平與POR活性明顯相關(guān)(r=0.658,P=0.028)。 5.我們建立了從大量人肝樣本得到的POR生物學數(shù)據(jù),這些數(shù)據(jù)為研究中國人群的CYP酶對藥物代謝的藥代動力學提供了基本有用的信息。
【關(guān)鍵詞】：細胞色素P450氧化還原酶 mRNA活性 中國正常人肝
【學位授予單位】：鄭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R3411
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文對照縮略表11-12
• 引言12-14
• 實驗材料14-19
• 實驗方法19-27
• 實驗結(jié)果27-48
• 討論與分析48-53
• 結(jié)論53-54
• 參考文獻54-57
• 綜述 細胞色素P450氧化還原酶的相關(guān)研究的概述57-79
• 參考文獻74-79
• 個人簡歷79-80
• 致謝80

【共引文獻】

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