本文關(guān)鍵詞：基于慢性疲勞綜合征線蟲(chóng)模型的中藥篩選及單體藥效研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：慢性疲勞綜合征(chronic fatigue syndrome, CFS)由美國(guó)疾病控制和預(yù)防中心(CDC)于1988年正式命名,是一種持續(xù)時(shí)間≥6個(gè)月的原因不明的精神及軀體的亞健康狀態(tài),以疲勞、低熱(或自覺(jué)發(fā)熱)、咽喉痛、肌痛、關(guān)節(jié)痛、頭痛、注意力不易集中、記憶力差、睡眠障礙和抑郁等非特異性表現(xiàn)為主的綜合征,無(wú)法自行緩解,臨床檢查多無(wú)明顯器質(zhì)性改變。近年來(lái)隨著社會(huì)生活方式改變,環(huán)境惡化等多方面因素影響,CFS發(fā)病人數(shù)呈逐年上升趨勢(shì),好發(fā)年齡為30-50歲之間的青壯年階段,是白領(lǐng)工作人群早衰、猝死的重要危險(xiǎn)因素,但現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)CFS的防治措施十分有限。在中醫(yī)學(xué)中,CFS屬于“虛勞”等范疇,早在《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就對(duì)該類癥狀有詳細(xì)描述,治療方面也積累了豐富的經(jīng)驗(yàn)。中醫(yī)學(xué)者認(rèn)為CFS的病機(jī)以腎精虧虛為主,治療上多以補(bǔ)腎填精益氣為主,且處方用藥以自擬方和大方為主,對(duì)中藥資源的合理使用及CFS的中醫(yī)診療規(guī)范化均十分不利。因此從臨床治療常用方藥中篩選鑒定出對(duì)CFS具有確切療效的中藥具有重要意義。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中,小鼠CFS模型成本高、周期長(zhǎng)、造模方式復(fù)雜且效果不夠穩(wěn)定,不適合作為初期的藥物篩選模型,而秀麗隱桿線蟲(chóng)作為一種國(guó)際通用的模式生物,具有完整的神經(jīng)、運(yùn)動(dòng)、消化和生殖系統(tǒng),遺傳背景清晰,整體生命功能活動(dòng)及相關(guān)調(diào)控路徑與人類具有高度同源性,且生存周期短,成本較低,符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理要求,樣本量充足,可控性強(qiáng),轉(zhuǎn)基因操作靈活,可以觀察到慢性應(yīng)激疾病逐步進(jìn)展對(duì)線蟲(chóng)壽命、行為、群體等多方面的影響,是適宜研究CFS的良好素材。本研究引入簡(jiǎn)單模式生物秀麗線蟲(chóng)及其轉(zhuǎn)基因株進(jìn)行CFS相關(guān)研究。Aβ1-42轉(zhuǎn)基因秀麗線蟲(chóng)株能模擬蛋白穩(wěn)態(tài)失衡所致CFS病理表現(xiàn),結(jié)合線蟲(chóng)生存狀態(tài),能體現(xiàn)CFS縮短健康生存時(shí)間的整體疾病轉(zhuǎn)歸,并且成本低、周期短、檢測(cè)指標(biāo)穩(wěn)定,是進(jìn)行CFS相關(guān)藥物篩選的合適模型。本研究旨在嘗試?yán)镁�蟲(chóng)模型篩選防治CFS中藥,并對(duì)藥物對(duì)CFS干預(yù)效果進(jìn)行初步探索,為擴(kuò)展后續(xù)研究打下基礎(chǔ)。目的：1.嘗試?yán)棉D(zhuǎn)基因線蟲(chóng)模型模擬CFS蛋白穩(wěn)態(tài)失衡的病理環(huán)節(jié),篩選防治CFS的有效中藥;2.利用多種應(yīng)激線蟲(chóng)模型模擬CFS相關(guān)病理環(huán)節(jié),以篩選出的補(bǔ)腎中藥制何首烏為例,探討其主要有效單體成分二苯乙烯苷對(duì)CFS線蟲(chóng)模型的防治效果。方法：1.中藥篩選實(shí)驗(yàn)：利用蛋白失衡應(yīng)激模型轉(zhuǎn)基因線蟲(chóng)CL4176篩選藥物,分組為對(duì)照組及藥物干預(yù)各劑量組,對(duì)17種藥物進(jìn)行干預(yù)效果檢測(cè),觀察蛋白毒性誘導(dǎo)的應(yīng)激模式下,藥物對(duì)線蟲(chóng)平均非癱瘓時(shí)間的作用效果;2.在高、中、低劑量組(TSG-125μM組、TSG-62.5μM組、TSG-25μM組)二苯乙烯苷干預(yù)下,觀察成年線蟲(chóng)對(duì)體外環(huán)境的熱應(yīng)激(35℃)、氧化應(yīng)激(胡桃醌250μ g/mL)及體內(nèi)毒性蛋白應(yīng)激(A β 1-42轉(zhuǎn)基因突變株CIA176)的耐受能力和平均存活時(shí)間,并進(jìn)一步評(píng)估二苯乙烯苷對(duì)正常狀態(tài)下線蟲(chóng)平均生存時(shí)間、30s運(yùn)動(dòng)距離、第4天和第10天線蟲(chóng)肌肉細(xì)胞GFP數(shù)目、30s咽泵運(yùn)動(dòng)頻次及生殖能力的作用效果。結(jié)果：1.利用蛋白失衡應(yīng)激模型轉(zhuǎn)基因線蟲(chóng)CL4176進(jìn)行中藥篩選：中藥顆粒溶液直接添加入線蟲(chóng)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基,從17種單味中藥顆粒中篩選出2種可延長(zhǎng)線蟲(chóng)模型平均非癱瘓時(shí)間的藥物：淫羊藿、制何首烏,以制何首烏效果最佳。2.與空白對(duì)照組比較,二苯乙烯苷TSG-125μM組、TSG-62.5μM組可減輕蛋白毒性作用(P0.05),高中低干預(yù)各組均能增加線蟲(chóng)熱應(yīng)激存活時(shí)間(P0.05), TSG-125 μ M組可增加線蟲(chóng)氧化應(yīng)激存活時(shí)間(P0.05)、TSG可右移野生型線蟲(chóng)的生存曲線,延長(zhǎng)線蟲(chóng)平均生存時(shí)間及最大生存時(shí)間(P0.05)。與對(duì)照組比,高濃度干預(yù)組能增加線蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)距離和咽泵運(yùn)動(dòng)頻次(P0.05),,延緩線蟲(chóng)第4天和第10天肌肉細(xì)胞核GFP熒光強(qiáng)度和數(shù)目的衰減(P0.05)。生殖能力各組間比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.在利用轉(zhuǎn)基因秀麗線蟲(chóng)CFS模型篩選17種單味中藥顆粒過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)淫羊藿、制何首烏均可延長(zhǎng)線蟲(chóng)模型平均非癱瘓時(shí)間,以制何首烏效果最佳。2.制何首烏主要藥效成分二苯乙烯苷能增強(qiáng)線蟲(chóng)對(duì)體內(nèi)外環(huán)境壓力的應(yīng)激能力,延長(zhǎng)線蟲(chóng)壽命,增加線蟲(chóng)的運(yùn)動(dòng)距離和咽泵運(yùn)動(dòng)頻次,延緩線蟲(chóng)肌肉細(xì)胞的流失的同時(shí)未干擾線蟲(chóng)正常生殖力,可能成為防治人類CFS的有效藥物。這些工作為二苯乙烯苷在防治CFS方面的進(jìn)一步機(jī)制探索及藥理研究打下基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：應(yīng)激 秀麗線蟲(chóng) 中藥篩選 何首烏 二苯乙烯苷 慢性疲勞綜合征
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285;R-332
【目錄】：

• 縮略詞表5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 前言11-13
• 第一部分 利用轉(zhuǎn)基因線蟲(chóng)蛋白失衡應(yīng)激模型篩選中藥13-27
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料14-18
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)生物14-15
• 1.1.2 主要試劑及藥物15-17
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備17-18
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法18-20
• 1.3 結(jié)果20-23
• 1.4 討論23-26
• 1.5 小結(jié)26-27
• 第二部分 TSG對(duì)慢性疲勞綜合征線蟲(chóng)模型影響的研究27-46
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料28-29
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)生物28-29
• 2.1.2 主要試劑及藥物29
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備29
• 2.2 檢測(cè)指標(biāo)及方法29-33
• 2.3 結(jié)果33-40
• 2.4 討論40-45
• 2.5 小結(jié)45-46
• 研究結(jié)論及展望46-47
• 結(jié)論46
• 展望46-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 綜述一53-60
• 參考文獻(xiàn)57-60
• 綜述二60-68
• 參考文獻(xiàn)65-68
• 致謝68-70
• 在讀期間所著文章和所獲獎(jiǎng)勵(lì)70-71

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 沈自尹,陳瑜,黃建華,胡作為;EF延緩HPAT軸衰老的基因表達(dá)譜研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2004年01期

2 王文健;沈自尹;張新民;陳素珍;張玲娟;吳波水;;補(bǔ)腎法對(duì)老年男性下丘腦-垂體-性腺軸作用的臨床和實(shí)驗(yàn)研究[J];中醫(yī)雜志;1986年04期

  本文關(guān)鍵詞：基于慢性疲勞綜合征線蟲(chóng)模型的中藥篩選及單體藥效研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：296747