1993年,Serrano等利用酵母雙雜交技術(shù)在篩選與人CDK4相關(guān)的蛋白時找到一個能有效地抑制CDK4活性、相對分子質(zhì)量為16 ku的蛋白質(zhì),將其命名為p16蛋白。p16基因（p16,MTS1,CDKN2）位于人類第9號染色體短臂2區(qū)1帶區(qū)域(9P²¹)。PCR和Southern雜交證實在黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、白血病中p16基因經(jīng)常發(fā)生缺失、重排及轉(zhuǎn)錄水平表達的喪失。目前p16研究主要集中在腫瘤發(fā)生中p16失活方式及作為抗腫瘤藥物研究等方面,在轉(zhuǎn)基因動物水平的研究很少。我們構(gòu)建p16真核表達載體pCR^?3.1/p16,建立其穩(wěn)定表達的NIH3T3細胞株,應用顯微注射法制備攜帶人p16基因的轉(zhuǎn)基因小鼠,可為將來在個體水平研究p16基因的功能奠定基礎(chǔ)。 本研究共分兩部分,第一部分是p16真核表達載體的構(gòu)建及其穩(wěn)定表達的NIH3T3細胞株的建立;第二部分是用顯微注射法制備攜帶人p16基因的轉(zhuǎn)基因小鼠。 第一部分 p16真核表達載體的構(gòu)建及其穩(wěn)定表達的NIH3T3細胞株的建立 實驗目的 構(gòu)建pCR^R

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

重組表達質(zhì)粒的初步酶切鑒定(EcoRI)

受態(tài)大腸桿菌DH5a，從含氨節(jié)青霉素的LB平板中隨機挑出8個抗性菌落，擴大培養(yǎng)，常規(guī)堿裂解法提取質(zhì)粒，并經(jīng)EcoRI和Xh0I酶解后，0.9%瓊脂糖電泳測定(圖1.2，圖1.3)。12345678910................~~..............圖1.2重組表達質(zhì)粒的初步酶切鑒定(EcoRI)1一攤一、9一10:8個陽性克隆質(zhì)粒;3、8:pcRO3.1載體1234M................1:pCR.3.1(EeoRI);蘭衛(wèi)魚留，艾口2，刃pCR’3.l/pl6(EeoRI):4:pCR’3.1/p16(EeoRI+xhol);一!口扣一二匆M:Marker圖1.3重組表達質(zhì)粒的酶切鑒定2.2表達質(zhì)粒pcR⑧3.1/p6l的測序重組娜妙3.1/p6l序列測定結(jié)果(圖1.4)顯示p16cDNA堿基序列按照預期方式定向插人表達載體，且接口處序列正確，但是比正常讀碼框架啟始密碼子前多了編碼8個氨基酸的密碼子序列a華名gaccggcggc引交絕gacgac，

圖2.5仔鼠基因組DNA討轉(zhuǎn)基因動物是指以實驗的方法導人整合并能遺傳給后代的一類動物。轉(zhuǎn)基密結(jié)合而產(chǎn)生的基因工程動物，轉(zhuǎn)基因動一起來，使人們能夠從時間與空間四維律，除用于建立醫(yī)學研究的各種轉(zhuǎn)基因動展生物反應器研究，獲得人類所需要的的生物制品。自從1980年Go而n等[‘〕報道用原，


本文編號：2957298