尿路感染是一種常見病、多發(fā)病，大腸埃希菌為其主要致病菌，導致上行性尿路感染的大腸埃希菌大多具有P菌毛，稱為致腎盂腎炎大腸埃希菌（UPEC）。編碼P菌毛的粘附基因群（pap）位于UPEC的染色體上，由11個基因組成，其中papA編碼P菌毛的主要菌毛結(jié)構(gòu)亞單位，papG編碼P菌毛尖端與尿道上皮細胞表面受體Gal-Gal結(jié)合的真正粘附素。近年來，UPEC papA和papG因在P菌毛組成和粘附致病中的重要作用而成為研究的焦點，尤其對papA和papG的基因分型研究在UPEC的流行病學、致病機理、遺傳變異和免疫防治研究中的作用在國外越來越引起人們的關(guān)注，國內(nèi)尚處于空白。 首先，本研究建立了UPEC papC PCR的方法，在其擴增片段內(nèi)設(shè)計了PstⅠ內(nèi)切酶位點，可用于PCR產(chǎn)物的鑒定，提高該方法的特異性。采用上述方法對國內(nèi)分離的147株尿源性大腸埃希菌進行檢測，UPEC菌株檢出率為31.98％（47／147株）。與血凝試驗相比較，兩種方法檢測結(jié)果無明顯差異（P＞0.05）。繼而采用多重PCR方法對45株UPEC菌株分別進行了papA和papG的基因分型，探討國內(nèi)UPEC菌株的papA和p... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

成熟P菌毛的各亞單位組裝模示圖

圖2.IA、B、c三個PcR組引物組成及擴增片段大小示意圖2.3.3反應體系:IOX擴增緩沖液5pl，MgC123nunol/LdNTPZOOpmol/L，primerpoolA、B、C內(nèi)5種引物各ZOpmol，模板DNA質(zhì)粒DNA/細菌染色體DNA，加DDW至50pl，混合加入TaqDNA聚合酶4U和石蠟油30pl，離心IOSee.2.3.4反應條件:94oC變性IOmin94’Clmin，62℃lmin，72aClmin10see，3個循環(huán)94oClmin，67oClmin，72aCI.5min25個循環(huán)72’C延伸IOmin.

結(jié)果重PCR擴增結(jié)果色體DNA為模板，應用paPG基因片段。I型papG陽性對照菌株U11型papG陽性對照菌株UPEC132對照菌株E.coliK一12P678一54株p即G擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果證明全部UPECpapGPCR擴增陽性率為101234

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]致腎盂腎炎大腸桿菌papA基因的克隆及序列分析[J]. 陳錦英,康寧,李方濤.  中華微生物學和免疫學雜志. 2000(03)
[4]致腎盂腎炎大腸桿菌粘附特性的研究[J]. 陳錦英,楊惠彬,何建民,蘇琦華.  微生物學通報. 1995(01)
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本文編號：2938248