目的:研究Tribble同源蛋白3(TRIB3)對(duì)新生大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞缺氧缺血后細(xì)胞增殖和凋亡的影響,為TRIB3在新生兒缺氧缺血性腦損傷治療方面提供初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:無血清法培養(yǎng)新生大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞,氧糖剝奪(OGD)法體外模擬新生兒缺氧缺血性腦損傷細(xì)胞模型,Western blot和qRT-PCR檢測(cè)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞中TRIB3蛋白和mRNA表達(dá)情況; TRIB3 siRNA或毒胡蘿卜素(Tg)處理OGD海馬神經(jīng)元細(xì)胞并培養(yǎng)24 h,Western blot檢測(cè)TRIB3的蛋白表達(dá)水平。采用MTT檢測(cè)細(xì)胞存活率,Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)基因(Bax、Caspase-3和Bcl-2)以及NF-κB的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:與正常對(duì)照組(Control)比較,OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞TRIB3蛋白和mRNA表達(dá)水平顯著升高(P 0. 05); TRIB3 siRNA顯著降低TRIB3蛋白表達(dá)水平,并促進(jìn)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖; TRIB3 siRNA顯著增加Bcl-2/Bax比值,而顯著降低Caspase-3蛋白表達(dá)水平(P 0. 05); TRIB3低表達(dá)顯著抑制NF-κB表達(dá)(P 0. 05);另外,Tg逆轉(zhuǎn)TRIB3 siRNA對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)的抑制作用。結(jié)論:TRIB3沉默促進(jìn)缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡,其機(jī)制與抑制NF-κB蛋白表達(dá)水平相關(guān)。
【部分圖文】：

x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2結(jié)果2．1OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞中TＲIB3表達(dá)情況Westernblot結(jié)果顯示(圖1A)，與Control組比較，OGD組TＲIB3蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05)。qＲT-PCＲ結(jié)果顯示(圖1B)，與Control組比較，OGD組TＲIB3mＲNA表達(dá)水平明顯增加(P＜0.05)。此外，與siNC組比較，TＲIB3siＲNA顯著降低TＲIB3基因的表達(dá)水平(P＜0．05)。*P＜0．05圖1OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞中TＲIB3基因表達(dá)的比較2．2TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖MTT檢測(cè)結(jié)果顯示(圖2):與siNC組比較，siTＲIB3組細(xì)胞存活率顯著增加(P＜0．05)。*P＜0．05圖2TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖2．3TＲIB3低表達(dá)抑制OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示(圖3):與Control組比較，OGD組Bcl-2/Bax比率顯著降低(P＜0．05)，Caspase3表達(dá)顯著升高(P＜0．05)。與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組Bcl-2/Bax比率顯著增加(P＜0．05)，而Caspase3蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0．05)。2．4TＲIB3低表達(dá)可以抑制NF-κB活化水平Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(圖4):與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組NF-κB蛋白水平顯著降低(P＜0.05)。此外，與siTＲIB3組比較，加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)物Tg之后，NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著上升(P＜0.05)。3討論本研究發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細(xì)胞在缺氧缺血后TＲIB3蛋白和mＲNA表達(dá)水平顯著升高

楸冉希?OGD組TＲIB3蛋白表達(dá)水平顯著升高(P＜0.05)。qＲT-PCＲ結(jié)果顯示(圖1B)，與Control組比較，OGD組TＲIB3mＲNA表達(dá)水平明顯增加(P＜0.05)。此外，與siNC組比較，TＲIB3siＲNA顯著降低TＲIB3基因的表達(dá)水平(P＜0．05)。*P＜0．05圖1OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞中TＲIB3基因表達(dá)的比較2．2TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖MTT檢測(cè)結(jié)果顯示(圖2):與siNC組比較，siTＲIB3組細(xì)胞存活率顯著增加(P＜0．05)。*P＜0．05圖2TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖2．3TＲIB3低表達(dá)抑制OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示(圖3):與Control組比較，OGD組Bcl-2/Bax比率顯著降低(P＜0．05)，Caspase3表達(dá)顯著升高(P＜0．05)。與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組Bcl-2/Bax比率顯著增加(P＜0．05)，而Caspase3蛋白表達(dá)水平顯著降低(P＜0．05)。2．4TＲIB3低表達(dá)可以抑制NF-κB活化水平Westernblot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示(圖4):與siNC組比較，TＲIB3siＲNA組NF-κB蛋白水平顯著降低(P＜0.05)。此外，與siTＲIB3組比較，加入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)物Tg之后，NF-κB蛋白表達(dá)水平顯著上升(P＜0.05)。3討論本研究發(fā)現(xiàn)海馬神經(jīng)元細(xì)胞在缺氧缺血后TＲIB3蛋白和mＲNA表達(dá)水平顯著升高。TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖，增加Bcl/Bax比值，·229·現(xiàn)代醫(yī)學(xué)(ModernMedicalJournal)2019年8月，47(8)

*P＜0．05圖3TＲIB3低表達(dá)抑制OGD后海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡*P＜0．05圖4TＲIB3低表達(dá)抑制NF-κB蛋白表達(dá)水平降低Caspase-3蛋白表達(dá)水平并抑制NF-κB蛋白表達(dá)。另外，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)物Tg可以逆轉(zhuǎn)TＲIB3沉默對(duì)NF-κB蛋白表達(dá)的抑制作用。研究結(jié)果表明TＲIB3低表達(dá)促進(jìn)缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，其機(jī)制與抑制NF-κB蛋白表達(dá)水相關(guān)。TＲIB3是TＲIB基因家族成員之一，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)，該家族成員有三個(gè)，分別是TＲIB1、TＲIB2和TＲIB3，其中研究最多的是TＲIB3。TＲIB3首次是在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一種抑制有絲分裂的絲氨酸蘇氨酸蛋白激酶［8］。近年來，研究發(fā)現(xiàn)，TＲIB3在不同器官組織細(xì)胞中差異性表達(dá)。在胃癌［9］、結(jié)直腸癌［10］、肺癌和食管癌［11］等不同癌癥中，TＲIB3表達(dá)水平中顯著升高。在脫髓鞘的突變鼠髓磷脂分解過程中，TＲIB3的表達(dá)顯著上升［12］。此外，TＲIB3的蛋白表達(dá)在帕金森癥患者黑質(zhì)致密部的多巴胺能神經(jīng)元中顯著上調(diào)，同時(shí)在帕金森細(xì)胞模型中也增加［13］。然而，TＲIB3在新生兒缺氧缺血性腦損傷中的表達(dá)情況未見報(bào)道。于是，我們采用缺氧缺血誘導(dǎo)海馬神經(jīng)元細(xì)胞建立新生兒缺氧缺血性腦損傷模型，并采用Westernblot和qＲT-PCＲ檢測(cè)了TＲIB3的表達(dá)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)缺氧缺血后海馬神經(jīng)元細(xì)胞TＲIB3蛋白和mＲNA表達(dá)水平顯著升高，提示TＲIB3差異性表達(dá)也與新生兒缺氧缺血性腦損傷有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)［14-15］，HIBD可以導(dǎo)致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，進(jìn)而啟動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞凋亡。此外，F(xiàn)ang等［
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本文編號(hào)：2866697