目的：1.觀察chemerin及其受體chemerinR基因在小鼠各臟器中的表達(dá)情況；探討3T3-L1脂肪細(xì)胞分化成熟過程中chemerin及其受體基因表達(dá)的變化。2.探討PPAR-γ激動(dòng)劑——羅格列酮對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞chemerin及其受體基因表達(dá)的影響。3.重組chemerin蛋白對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響并觀察其對(duì)脂聯(lián)素、瘦素和PPAR-γ2等基因表達(dá)的影響。 方法：1.提取正常小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌等臟器組織中總RNA,采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)其中chemerin及chemerinR基因表達(dá)水平；體外培養(yǎng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞并誘導(dǎo)分化,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)誘導(dǎo)分化過程中不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因的表達(dá)變化。2.3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化至第10天為正常對(duì)照組；另一組在誘導(dǎo)分化過程中用10μM羅格列酮干預(yù)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)不同天數(shù)(0、2、4、6、8、10天)chemerin和chemerinR基因表達(dá)情況。3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,分別以不同濃度梯度(0、0.μM、1μM、10μM)的羅格列酮干預(yù)24小時(shí)后收集細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)chemerin和chemerinR基因的表達(dá)情況。3.3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化至第10天為正常對(duì)照組；一組誘導(dǎo)分化過程中用羅格列酮干預(yù)；另一組予以chemerin蛋白干預(yù)。采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)第10天PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因表達(dá)情況。3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)成熟后,分別以不同濃度梯度(0、2.5ng/m1、25 ng/ml、50 ng/m1)的chemerin蛋白作用24小時(shí)后收集細(xì)胞,實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)PPAR-γ2、C/EBPa基因以及adiponectin、leptin基因的表達(dá)情況。 結(jié)果：1、chemerin及其受體基因在小鼠肝臟、脂肪、胃、脾臟、腎臟、心臟、骨骼肌中均有表達(dá)；chemerin及chemerinR基因低表達(dá)于3T3-L1前體脂肪細(xì)胞中,并隨前體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟表達(dá)水平呈逐漸上調(diào)趨勢(shì)(P0.05)。2、與對(duì)照組相比羅格列酮組對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中及成熟的3T3-Ll脂肪細(xì)胞chemerin和chemerinR基因均起上調(diào)作用(P0.05)。3、與對(duì)照組相比在3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中第10天羅格列酮干預(yù)組、chemerin蛋白組均上調(diào)PPAR-γ2、C/EBPa、adiponectin、leptin基因的表達(dá)(p＜0.05)。3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后,與對(duì)照組相比chemerin蛋白組上調(diào)了PPARγy 2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達(dá)(p0.05)。 結(jié)論：1.chemerin及其受體基因在小鼠脂肪組織中均有表達(dá)；在3T3-L1脂肪前體細(xì)胞分化過程中,chemerin及其受體基因表達(dá)逐漸上調(diào)。2.PPAR-Y激動(dòng)劑-羅格列酮上調(diào)chemerin、chemerinR基因的表達(dá)。3.chemerin蛋白上調(diào)成熟3T3-L1脂肪細(xì)胞中PPAR-γ2、C/EBPa及adiponectin、leptin基因的表達(dá)。
【學(xué)位單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2010
【中圖分類】：R363
【部分圖文】：

RNA電泳圖

A260/A28O在 1.8一2.0之間，說明RNA提取效率較好，純度符合實(shí)驗(yàn)要求。二.小鼠各臟器ehemerin及ehemerinR表達(dá)情況如圖2所示，chemerin及chemerinR基因在小鼠體內(nèi)廣泛表達(dá)，兩者在脂肪組織中均有表達(dá)。p一ac” n(550bp)e卜eme而n(3弓sbP) 2345678圖2(A)小鼠臟器組織chemerin基因表達(dá)電泳圖l一8泳道依次為:骨骼肌、胃、脾、’腎臟、Marker、脂肪、心臟和盯臟p一ac‘。(349bp)chemen吸(119bP)圖2(B)小鼠臟器組織ehemeri。、ChemerinR從防!表達(dá)電泳l到l一8泳道依次為:骨骼j刀L、胃、脾、’{圣臟、Marker、脂肪、心臟和)11幾J樁

A260/A28O在 1.8一2.0之間，說明RNA提取效率較好，純度符合實(shí)驗(yàn)要求。二.小鼠各臟器ehemerin及ehemerinR表達(dá)情況如圖2所示，chemerin及chemerinR基因在小鼠體內(nèi)廣泛表達(dá)，兩者在脂肪組織中均有表達(dá)。p一ac” n(550bp)e卜eme而n(3弓sbP) 2345678圖2(A)小鼠臟器組織chemerin基因表達(dá)電泳圖l一8泳道依次為:骨骼肌、胃、脾、’腎臟、Marker、脂肪、心臟和盯臟p一ac‘。(349bp)chemen吸(119bP)圖2(B)小鼠臟器組織ehemeri。、ChemerinR從防!表達(dá)電泳l到l一8泳道依次為:骨骼j刀L、胃、脾、’{圣臟、Marker、脂肪、心臟和)11幾J樁
【參考文獻(xiàn)】

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2 張繼峰;肥胖基因的研究進(jìn)展[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1998年01期

3 高玉霞;肥胖基因的研究進(jìn)展[J];中國(guó)臨床營(yíng)養(yǎng)雜志;2003年03期

4 吳海婭;賈偉平;魏麗;陸俊茜;包玉倩;項(xiàng)坤三;;肥胖及2型糖尿病患者血清視黃醇結(jié)合蛋白4水平的變化及其臨床意義[J];中華內(nèi)分泌代謝雜志;2006年03期

5 亓良森;;2型糖尿病患者血清瘦素水平和胰島素抵抗之間的關(guān)系[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)藥雜志;2008年01期

6 丁秀原;米杰;程紅;趙小元;侯冬青;;中年人群血清瘦素水平與代謝綜合征及其組分的關(guān)系[J];中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2007年04期

本文編號(hào)：2866591