目的:腸道病毒作為小核糖核酸病毒的成員之一,其病原特性已得到了廣泛的研究,為進(jìn)一步探討其尚未完全清楚的病理學(xué)機(jī)理,利用來源于恒河猴的不同免疫細(xì)胞,對(duì)�？刹《�6型(Echovirus 6,Echo 6)毒株與樹突狀細(xì)胞的作用關(guān)系及其特征做了初步分析。方法:利用流式細(xì)胞儀及抗不同樹突狀細(xì)胞表面特征分子的抗體,從恒河猴外周血及骨髓分離未成熟樹突狀細(xì)胞,經(jīng)體外誘導(dǎo)培養(yǎng)后,以Echo 6病毒在感染復(fù)數(shù)為0.1的條件下感染樹突狀細(xì)胞,并于感染后不同時(shí)間點(diǎn)收集細(xì)胞,檢測(cè)病毒載量,繪制病毒增殖曲線,同時(shí)對(duì)上清中相關(guān)細(xì)胞因子含量做出動(dòng)態(tài)檢測(cè)。結(jié)果:源于恒河猴外周血PBMC分選出的樹突狀細(xì)胞以成熟期樹突狀細(xì)胞(CD11~+/CD83~+)居多;而源于骨髓的細(xì)胞經(jīng)粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)和重組人白細(xì)胞介素-4(recombinant human interleukin-4,rhIL-4)刺激培養(yǎng)后誘導(dǎo)分化的樹突狀細(xì)胞則以未成熟細(xì)胞為主。Echo 6型病毒分別對(duì)未成熟樹突狀細(xì)胞和成熟樹突狀細(xì)胞進(jìn)行感染后顯示,病毒在未成熟樹突狀細(xì)胞中有明顯增殖的趨勢(shì)而非在成熟樹突狀細(xì)胞中增殖。進(jìn)一步檢測(cè)病毒感染這些細(xì)胞后效應(yīng)分子的表達(dá)情況發(fā)現(xiàn),感染了Echo 6型病毒的未成熟樹突狀細(xì)胞出現(xiàn)腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6,IL-6)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平的明顯上升,同時(shí)這些細(xì)胞的表面標(biāo)記呈現(xiàn)CD11~+/CD83~+趨勢(shì)。結(jié)論:Echo 6型病毒能夠感染未成熟樹突狀細(xì)胞并在其中出現(xiàn)明顯增殖趨勢(shì),并在上調(diào)細(xì)胞TNF-α和rh IL-6表達(dá)水平的同時(shí),促進(jìn)這些細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒鞓渫粻罴?xì)胞。
【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒與細(xì)胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 動(dòng)物倫理
    1.4 恒河猴樹突狀細(xì)胞的分離及培養(yǎng)
        1.4.1 外周血單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞
            1.4.1. 1 外周血單核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）的分離
            1.4.1. 2 免疫磁珠分選CD1c+樹突狀細(xì)胞
            1.4.1. 3 CD1c+樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)
        1.4.2 骨髓源樹突狀細(xì)胞
            1.4.2. 1 骨髓源樹突狀細(xì)胞的分離
            1.4.2. 2 骨髓源樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)
    1.5 流式細(xì)胞分選
    1.6 Echo 6型病毒滴度的測(cè)定
    1.7 病毒感染細(xì)胞
    1.8 流式細(xì)胞檢測(cè)
    1.9 RNA提取
    1.1 0 實(shí)時(shí)定量PCR
    1.1 1 統(tǒng)計(jì)方法
2 結(jié)果
    2.1 恒河猴樹突狀細(xì)胞的分離培養(yǎng)
    2.2 Echo 6型病毒對(duì)未成熟樹突狀細(xì)胞的感染
    2.3 Echo 6型病毒對(duì)成熟樹突狀細(xì)胞的感染
    2.4 Echo 6型病毒感染猴樹突狀細(xì)胞可以上調(diào)TNF-α和IL-6的表達(dá)
3 討論

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