本文關(guān)鍵詞：帕金森病腦片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途徑研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：建立離體腦片的培養(yǎng)體系與研究系統(tǒng),在腦片水平上建立帕金森病模型。研究多巴胺和左旋多巴對于中腦離體腦片多巴胺能細(xì)胞的毒性作用及其機(jī)制,以及醌氧化還原酶(Quinone oxidoreductase, NQO1)對于多巴胺細(xì)胞損傷的保護(hù)效應(yīng),從而進(jìn)一步探究帕金森病的發(fā)病機(jī)制以及治療措施。 方法：建立并評價離體腦片模型,通過免疫熒光、蛋白質(zhì)印跡(Western Blot)檢測目標(biāo)蛋白多巴胺能細(xì)胞的特異性蛋白(Tyrosine hydroxylase,TH)的表達(dá),運(yùn)用氯化硝基四氮唑藍(lán)NBT/甘氨酸法等實驗技術(shù),檢測醌化蛋白的含量變化,從而鑒定不同濃度多巴胺對黑質(zhì)腦片多巴胺能細(xì)胞的毒性作用及其與醌蛋白形成的相關(guān)性；通過將囊泡單胺類轉(zhuǎn)運(yùn)體(Vesicular monamine transporter2,VMAT2)進(jìn)行拮抗,探究多巴胺的毒性損傷與胞質(zhì)內(nèi)游離多巴胺的相關(guān)性。運(yùn)用離體腦片模型,研究左旋多巴對于多巴胺神經(jīng)元和5-羥色胺神經(jīng)元的毒性效應(yīng)。通過運(yùn)用小分子Ⅱ相酶誘導(dǎo)劑蘿卜硫素(Sulforaphane, SF)誘導(dǎo)體內(nèi)醌氧化還原酶NQO1的表達(dá),檢測探究誘導(dǎo)劑對于多巴胺造成的細(xì)胞毒性的預(yù)防作用。 結(jié)果：成功建立了離體腦片培養(yǎng)體系及基于多巴胺醌蛋白病因機(jī)制的帕金森病腦片模型。當(dāng)培養(yǎng)體系多巴胺濃度達(dá)到600μM,中腦腦片多巴胺能神經(jīng)元活性顯著降低,且同時細(xì)胞內(nèi)醌蛋白含量隨多巴胺濃度上升而增加。將VMAT2拮抗后,多巴胺細(xì)胞存活率進(jìn)一步降低,同樣伴隨醌蛋白含量升高。經(jīng)1μM濃度SF誘導(dǎo)NQO1后,能有效拮抗多巴胺的毒性效應(yīng),細(xì)胞活性顯著提高且醌蛋白含量減少。運(yùn)用左旋多巴后可導(dǎo)致中腦多巴胺細(xì)胞以及中縫核5-羥色胺細(xì)胞存活率下降,在濃度為600μM時有顯著差異,并與左旋多巴濃度負(fù)相關(guān),拮抗VMAT2后進(jìn)一步增加細(xì)胞的損傷。 結(jié)論：在腦片模型上,實驗結(jié)果顯示不同濃度多巴胺對于黑質(zhì)多巴胺能細(xì)胞的毒性損傷與醌蛋白形成有關(guān),提示帕金森病病因可能與多巴胺自身代謝過程中醌和醌蛋白的產(chǎn)生有關(guān)。另外,驗證了帕金森病運(yùn)用左旋多巴治療過程中產(chǎn)生的并發(fā)癥可能同樣與多巴醌及其醌蛋白相關(guān),且左旋多巴的這種毒性效應(yīng)累及到多巴胺神經(jīng)元和5-羥色胺神經(jīng)元。在腦片水平驗證了高表達(dá)醌氧化還原酶NQO1對多巴胺引起的細(xì)胞毒性作用具有一定的保護(hù)效應(yīng)。這為帕金森病的預(yù)防和治療措施的進(jìn)一步研究具有參考價值。
【關(guān)鍵詞】：腦片模型 帕金森病 多巴胺醌蛋白毒性 Ⅱ相酶誘導(dǎo)劑保護(hù)效應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R-332;R742.5
【目錄】：

• 論文摘要6-8
• Abstract8-11
• 綜述11-16
• 第一章.建立離體腦片的培養(yǎng)體系與研究系統(tǒng)16-25
• 前言16-17
• 1 材料與方法17-21
• 1.1 實驗材料17-19
• 1.2 實驗方法19-21
• 2 結(jié)果21-24
• 2.1 免疫焚光法檢測FBS培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細(xì)胞21
• 2.2 免疫焚光法檢測HS+5m/mL葡萄糖培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細(xì)胞21-22
• 2.3 免疫焚光法檢測HS+6.5ing/mL葡萄糖培養(yǎng)下離體中腦腦片TH陽性細(xì)胞22-23
• 2.4 FBS與HS培養(yǎng)條件下的離體腦片邊緣23-24
• 3 討論24-25
• 第二章.DA對離體腦片多巴胺能細(xì)胞的損傷作用25-37
• 前言25
• 1 材料與方法25-29
• 1.1 實驗材料25-27
• 1.2 實驗方法27-29
• 2 結(jié)果29-35
• 2.1 DA對離體腦片多巴胺細(xì)胞的毒性影響29-32
• 2.2 RS拮抗VMTA2對于離體腦片的損傷32-34
• 2.3 離體中腦腦片醌蛋白檢測34-35
• 3 討論35-37
• 第三章.SF對于離體腦片DA毒性的保護(hù)作用37-47
• 前言37
• 1 材料與方法37-42
• 1.1 實驗材料37-39
• 1.2 實驗方法39-42
• 2 結(jié)果42-45
• 2.1 SF預(yù)處理對離體腦片中NQO1的誘導(dǎo)42-43
• 2.2 SF預(yù)處理后對離體腦片多巴胺能細(xì)胞DA損傷的影響43-45
• 2.3 SF對于醌蛋白的作用45
• 3 討論45-47
• 第四章.左旋多巴對于離體腦片多巴胺細(xì)胞和5-羥色胺細(xì)胞的毒性作用47-55
• 前言47
• 1 材料與方法47-50
• 1.1 實驗材料47-48
• 1.2 實驗方法48-50
• 2 結(jié)果50-53
• 2.1 左旋多巴對離體腦片多巴胺細(xì)胞的損傷50-52
• 2.2 左旋多巴對離體腦片5-羥色胺細(xì)胞的毒性影響52-53
• 2.3 離體中縫核腦片醌蛋白檢測53
• 3 討論53-55
• 全文小結(jié)55-56
• 參考文獻(xiàn)56-65
• 致謝65

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：帕金森病腦片模型的建立及多巴胺醌的毒性作用及清除途徑研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：286253