【摘要】：人的體細(xì)胞可以經(jīng)幾個(gè)轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)變?yōu)檎T導(dǎo)多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)。這些細(xì)胞可以在體外自我更新、分化成三個(gè)胚層的細(xì)胞,避免了免疫排斥和倫理爭(zhēng)議等問(wèn)題,在藥物篩選、疾病模型以及再生醫(yī)學(xué)等方面具有巨大的應(yīng)用潛力,獲得了人們的廣泛關(guān)注。目前,人iPS細(xì)胞可以從不同類型的體細(xì)胞,如皮膚細(xì)胞,血液細(xì)胞等誘導(dǎo)而來(lái)。何種類型的細(xì)胞更易獲取,且誘導(dǎo)效率較高并不明確。而且,大多數(shù)iPS細(xì)胞的研究采用了病毒方法,由此引起的安全性問(wèn)題限制了iPS細(xì)胞進(jìn)一步的應(yīng)用。為加速人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞的研究,優(yōu)化出一套無(wú)飼養(yǎng)層細(xì)胞、無(wú)病毒插入、無(wú)動(dòng)物血清的誘導(dǎo)流程非常關(guān)鍵。在基礎(chǔ)上建立一個(gè)具有廣泛遺傳背景的非整合的人iPS細(xì)胞庫(kù)將是一個(gè)重要的疾病模型和機(jī)理研究的資源。 我們的匿名調(diào)查結(jié)果顯示尿液是最被捐贈(zèng)者接受的成體細(xì)胞捐贈(zèng)材料。我們優(yōu)化的收集方法可以成功地從不同年齡、性別及疾病患者尿液中分離出尿液細(xì)胞。我們已收集到患有神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)等疾病或者正常人的近50株尿液細(xì)胞,這些細(xì)胞捐贈(zèng)者年齡從2歲到70歲不等。 利用這些尿液細(xì)胞,我們優(yōu)化了非整合誘導(dǎo)的重編程流程。這一流程采用附加體將重編程因子導(dǎo)入尿液細(xì)胞中,整個(gè)過(guò)程不使用飼養(yǎng)層細(xì)胞、不使用病毒載體、并采用成分完全確定的人多能干細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)。我們驗(yàn)證最后得到的人iPS細(xì)胞無(wú)外源基因整合且具有多能性。與此前報(bào)道的附加體重編程方法相比,由于尿液細(xì)胞具有上皮細(xì)胞特性更易重編程,誘導(dǎo)時(shí)間縮短為20天,效率最高達(dá)到0.015%。另外,可以使用更少的重編程因子進(jìn)行誘導(dǎo),通過(guò)采用miR-302-367簇代替癌基因c-MYC,從而獲得更加安全的人誘導(dǎo)多能干細(xì)胞。 我們優(yōu)化的尿液細(xì)胞重編程方法具有廣泛的適應(yīng)性,可用于重編程此前收集到的不同年齡、性別及疾病患者的尿液細(xì)胞。運(yùn)用這一方法,我們已經(jīng)將20個(gè)不同個(gè)體來(lái)源的尿液細(xì)胞重編程得到了97株人iPS細(xì)胞系。這些非整合的人iPS細(xì)胞經(jīng)過(guò)一系列的鑒定后將給予凍存,組成尿液細(xì)胞來(lái)源的人iPS細(xì)胞庫(kù)。 我們將繼續(xù)從尿液細(xì)胞的收集和培養(yǎng),尿液細(xì)胞的誘導(dǎo)因子導(dǎo)入方法以及人iPS細(xì)胞的培養(yǎng)等方面優(yōu)化整個(gè)重編程流程,使得整個(gè)過(guò)程滿足cGMP的要求,從而為人iPS細(xì)胞在基礎(chǔ)研究和再生醫(yī)學(xué)方面的實(shí)際應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R329.2

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 尚慧;皖東牛皮膚成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)建系及生長(zhǎng)特性鑒定[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2018年

2 何永培;人尿液源性干細(xì)胞誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞來(lái)源的神經(jīng)嵴細(xì)胞模型的建立[D];華中科技大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2754916