發(fā)布時間：2020-05-28 11:33

【摘要】：本部分介紹了一種新的隨機多肽文庫的構(gòu)建方法，，即用基因組DNA為原料來構(gòu)建隨機多肽文庫。 一般認為，基因組DNA是不能夠直接用來表達出有生物學意義的蛋白質(zhì)或多肽。但是，如果我們需要的是隨機多肽，基因組DNA就可以被認為是非常有用的資源。當大的基因組DNA被僅識別4個核苷酸的限制性內(nèi)切酶酶切后，產(chǎn)生的短片段DNA可以近似的認為是隨機序列的片段，這樣的短的隨機片段在本實驗中被用來直接表達隨機多肽，成為隨機多肽文庫。例如人的基因組DNA為2.91×10~9bp，這樣大的基因組DNA經(jīng)識別4個核苷酸的限制性內(nèi)切酶(DpnⅡ或Tsp509I)酶切后，因為這種酶在基因組上平均每隔256bp即有一個酶切位點，因此可以產(chǎn)生約10~7(2.91×10~9／256)個片段。由于每個片段的平均長度為256bp，所以這樣的片段可以編碼85個氨基酸(256／3)，又由于每64個密碼子當中有3個終止密碼子，所以最后這樣的片段表達出的多肽的平均長度為21個氨基酸(64／3)。這些片段可以克隆到任何表達載體中。在這里我們將這些片段連接到用DpnⅡ(Tsp509I)的同尾酶BamHI(EcoRI)預先酶切的酵母雙雜交載體pGADT7上后，電擊轉(zhuǎn)化大腸桿菌形成隨機多肽文庫。 在論文中，我們構(gòu)建了兩個這樣的隨機多肽文庫。一個是用DpnⅡ酶切人基因組DNA，所構(gòu)建的文庫的容量為1.1×10~6cfu。另一個是用Tsp509I酶切人基因組DNA，所構(gòu)建的文庫的容量為1.4×10~7cfu。
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R341

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本文編號：2685180