發(fā)布時間：2020-05-25 00:39

【摘要】：目的 顱內動脈瘤在臨床上以自發(fā)腦出血、腦血管痙攣、動眼神經麻痹等局灶癥狀為主要表現,是最常見的腦血管病之一。先天性動脈瘤占大部分人群,發(fā)病率達萬分之一,以40-66歲最為常見。調查結果顯示,約有10%的病人入院前死亡,但仍約有500萬以上的隱匿性顱內動脈瘤未被發(fā)現和診斷。盡管在近十年里,動脈瘤的治療取得了長足的進步,但其致死率仍高達30%-40%,且預后不甚理想。目前,該病發(fā)病機制仍存在廣泛爭議,致病機理尚不清楚。僅發(fā)現芬蘭和日本人群中的發(fā)病率是其他人群的兩倍,在遺傳家系分析中找到了可能的相關基因,但并沒有進行更深入的功能研究。 近年來,研究者們用基因芯片來檢測顱內動脈瘤相關基因mRNA水平的變化,發(fā)現Bcl-2,COL1A2,COL3A1,COL5A2,CXCL12,TIMP4,TNC這7個基因的表達水平在3個或以上研究中都發(fā)生了明顯變化。這些在基因轉錄水平相關的研究均涉及到內皮細胞功能的紊亂,壁細胞的缺失,炎癥細胞浸潤以及細胞外基質的降解。 小RNA (microRNA)是由18-25個核苷酸組成的單鏈非編碼RNA。成熟小RNA通過與靶mRNA的3'UTR(非翻譯區(qū))互補結合在轉錄后水平調節(jié)其表達。據保守估計,小RNA調控約20%-30%的人類基因。研究顯示,小RNA的異常調控是某些疾病發(fā)生的重要因素之一,如腫瘤和癌癥。 迄今為止,研究者們尚未明確任何顱內動脈瘤致病的信號通路和關鍵因子,也未能通過相關基因的動物模型模擬疾病的表型,更沒有任何小RNA在顱內動脈瘤中的研究報導。 我們長期從事顱內動脈瘤的臨床工作,并在科研中積累了大量的實驗成果。我們發(fā)現microRNA與顱內動脈瘤有著非常密切的關系。我們利用microRNA芯片對四例顱內動脈瘤樣本進行小RNA表達譜分析,通過RT-PCR驗證后得到18個異常表達的microRNA。同時利用mRNA芯片分析技術對兩例顱內動脈瘤樣本進行mRNA表達譜分析,通過數據篩選,得到11351個顱內動脈瘤mRNA表達量數據。利用IPA (Ingenuity pathway analysis)系統(tǒng),建立了顱內動脈瘤發(fā)病相關通路的分子網絡以及篩選這些miRNA對應的顱內動脈瘤發(fā)病相關的致病靶基因,發(fā)現這些異常表達的miRNA主要與血管內壁細胞凋亡、促進炎癥細胞增殖與浸潤、內皮細胞與平滑肌細胞和巨噬細胞的遷移等基因相關。 本課題將進行miRNA及其靶基因在顱內動脈瘤致病機制的研究,探求其調控的分子網絡在瘤體發(fā)生和發(fā)展中的作用,從時間和空間水平揭示miRNA調控顱內動脈瘤的分子體系。評估m(xù)iRNA作為顱內動脈瘤生物標記的可能性,為顱內動脈瘤提供新的診斷位點和治療干預新靶點。本課題將為顱內動脈瘤的分子機制提供有價值的研究成果。 方法 1.篩選在顱內動脈瘤中異常表達并具有顯著生物學意義的microRNA。 2.篩選在顱內動脈瘤中異常表達并具有顯著生物學意義的mRNA。 3.確定microRNA調控的關鍵靶基因在顱內動脈瘤組織中的表達水平,建立顱內動脈瘤發(fā)病的分子調控系統(tǒng)。 4.分析顱內動脈瘤形成和發(fā)展過程中microRNA對細胞增殖、遷移和凋亡的影響,確定其在致病機理中發(fā)揮的功能。 結果 1.應用Agilent Human miRNA array AMADID1643芯片對4組動脈瘤樣本及對照組織樣本進行初步的篩選后,得到有異常表達的miRNA32種,對其中的29種miRNA進行RT-PCR驗證(針對新采集的10組動脈瘤樣本)后,有18種miRNA在顱內動脈瘤中異常表達。 2.應用Agilent Whole Human Genome Oligo Microarray (4×44K)芯片對2組動脈瘤樣本及對照組織樣本進行篩選后,得到有異常表達的mRNA11351個。 3.應用綜合性分析系統(tǒng)IPA,對18種miRNA對應的靶基因進行功能分析,發(fā)現與mRNA芯片結果對應的靶基因對比有624個基因重疊。 4.構建動脈瘤致病相關的分子網絡后,異常表達的miRNA所對應的靶基因主要在以下方面參與顱內動脈瘤的致�。貉軆绕ぜ毎蛲�、炎癥免疫細胞的增殖和浸潤、內皮細胞和平滑肌細胞的遷移。 5.分析IPA建立的動脈瘤致病機理的分子網絡,炎癥因子在顱內動脈瘤的形成和發(fā)展中扮演了重要角色。 結論 1. microRNA及其對應的靶基因在顱內動脈瘤的致病機理中扮演重要的角色。 2. microRNA在顱內動脈瘤的形成中主要通過內皮細胞的凋亡、炎癥免疫細胞的增殖和浸潤、內皮細胞和平滑肌細胞的遷移等機制發(fā)揮作用。 3.細胞免疫反應及細胞因子信號分子網絡是顱內動脈瘤致病機理中最主要致病途徑。
【學位授予單位】：中南大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.41;R3416

【共引文獻】

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本文編號：2679264