【摘要】：核受體，又叫核受體超家族(nuclear receptor superfamily)屬于配體活化的轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與了包括胚胎發(fā)育、細胞分化和內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定等生理過程。大多數(shù)核受體具有相似的結(jié)構(gòu)，其C端含保守的具有重要功能的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域(ligand bindingdomain，LBD)，，在這一部位還含有配體依賴的激活功能結(jié)構(gòu)域AF-2(activation function2)，在介導受體的二聚化、核定位、與輔活化子的結(jié)合方面起著重要的作用。核受體輔活化子(coactivator)是目前核受體研究的熱點和重點，它作為核受體和基礎轉(zhuǎn)錄復合物間的橋梁分子發(fā)揮作用并調(diào)諧了核受體的轉(zhuǎn)錄激活功能。人雌激素受體相關受體α_1(human estrogen receptor-related receptor α 1，hERR α 1)是核受體超家族中的孤兒受體(orphan receptor)成員，目前包括我們在內(nèi)的多家實驗室根據(jù)自身的研究成果都推測ERR α 1是一種新發(fā)現(xiàn)的與乳腺癌有密切關系的核受體，但目前對其具體的調(diào)控機理尚未弄清。 為進一步深入研究“孤兒”受體ERR α 1與乳腺癌的關系，弄清ERR α 1參與基因表達調(diào)控的詳細機理特別是核受體輔活化子在其中的作用，我們進行了如下的研究： 1、利用基于酵母Ga14轉(zhuǎn)錄因子的雙雜交系統(tǒng)，以ERR α1的LBD為“誘餌”篩選了人乳腺組織cDNA文庫。快速骨骼肌型肌鈣蛋白I(fast skeletal muscletroponin I，troponin 12，TNNI2)與包括SRC-1在內(nèi)的一些已知輔活化子蛋白質(zhì)一起被篩選出來。 2、應用酵母雙雜交技術研究TNNI2與多種核受體的相互作用。結(jié)果表明，TNNI2與PR、TR和RXR等多種核受體存在配體依賴的相互作用；與mERR α和hERRα 1等“孤兒”核受體的相互作用為配體非依賴，其中TNNI2與hERRα 1的相互作用最強。并且，TNNI2與核受體的相互作用依賴于核受體AF-2功能性結(jié)構(gòu)域的完整性。 3、在哺乳細胞瞬時共轉(zhuǎn)染實驗中，TNNI2顯示了對核受體ER、ERRα 1、SF1和ARP1反式激活功能的輔助活化作用，但單獨的TNN2并不顯著改變蟲熒光素酶(1uciferase)報告基因的轉(zhuǎn)錄效率。這些結(jié)果證實了TNNI2具有核受體輔活化子的功能。 第三軍醫(yī)大學博士學位論文 4.研究體外蛋白質(zhì)相互作用的GST捕獲實驗也證實了TNN12與ERR Ql的直接相 互作用。 5.在證實了TNNIZ與核受體存在相互作用并能輔助活化核受體的反式激活作用的 情況下，我們進一步采用缺失突變技術，利用酵母雙雜交實驗證明了TNN12與 核受體的相互作用定位于TNN12蛋白的1一128氨基酸殘基，這一區(qū)域包括TNN12 的氨基末端、抑制區(qū)和LXXLL模體(motif)即NR盒。哺乳細胞瞬時共轉(zhuǎn)染 實驗也證實，TNN121一128缺失突變體能夠通過與野生型TNN12競爭核受體的結(jié) 合，顯示其作為TNN12負顯性抑制劑的功能。這一結(jié)果進一步證實1一128氨基 酸區(qū)域確實是TNN12的核受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。 以上的研究充分證明了TNN12與許多其它輔活化子一樣，以配體依賴(對類固醇 激素受體而言)或非依賴(對孤兒受體而言)的方式與核受體功能性AF一2結(jié)構(gòu)域相互 作用，并增強多種核受體介導的轉(zhuǎn)錄作用，TNNIZ與核受體的相互作用定位于TNN12 蛋白1一128氨基酸。本研究證實，TNNIZ是一種新的通用核受體輔活化子。 我們通過一系列研究首次揭示了INN12除介導和調(diào)節(jié)脊椎動物橫紋肌收縮及參與 抑制新血管的形成外，尚存在作為核受體輔活化子參與基因表達調(diào)控的新功能。這項 研究發(fā)掘了INNIZ新的生物學功能，有助于我們對TNN12生物學功能的全面認識，并 加深了人們對核受體包括ERR Ql基因表達調(diào)控機制的認識。
【學位授予單位】：第三軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R341

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 陳健,陳敏,陳彬,周長保,李渝萍,張艷,曹廷兵,周度金;hERR1在乳腺癌中的表達及其對芳香族化酶表達的調(diào)控[J];第三軍醫(yī)大學學報;2002年10期

2 黃翠芬,葉棋濃;蛋白質(zhì)間相互作用技術的研究近況[J];中國生物化學與分子生物學報;1998年01期

3 王吉村,藥立波;從蛋白質(zhì)相互作用研究方法的發(fā)展看人們認識事物的過程[J];醫(yī)學與哲學;2000年05期

本文編號：2676845