【摘要】： 常規(guī)的蛋白質(zhì)化學(xué)修飾過程操作步驟多、周期長、修飾位點(diǎn)相對隨機(jī),容易引起蛋白質(zhì)的變性失活。本課題提出了蛋白質(zhì)分離過程和化學(xué)修飾過程的耦合技術(shù),能夠簡化原來的生產(chǎn)操作步驟,縮短操作時(shí)間,從而減少蛋白活性的損失,降低投資成本和生產(chǎn)費(fèi)用。 本課題選擇超氧化物歧化酶作為模型蛋白,選擇Q Sepharose Fast Flow作為固相分離介質(zhì),選擇單甲氧基聚乙二醇5000作為修飾劑,分別對超氧化物歧化酶的吸附條件,分離-化學(xué)修飾耦合過程的修飾條件以及分離-化學(xué)修飾耦合過程洗脫條件進(jìn)行了優(yōu)化,并對修飾后超氧化物歧化酶的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。 第二章對超氧化物歧化酶吸附條件進(jìn)行了考察,優(yōu)化出Q Sepharose Fast Flow吸附超氧化物歧化酶的最佳條件是:時(shí)間為30min,pH值為9.0,SOD濃度為3.0mg/ml,溫度為室溫,最佳吸附條件下吸附量約為22.5mg/ml。 第三章對超氧化物歧化酶分離-化學(xué)修飾耦合過程的修飾條件和洗脫條件進(jìn)行了考察,優(yōu)化出耦合過程的最佳修飾條件是:修飾時(shí)間為270min,修飾緩沖液濃度為40mmol/L,mPEG-5000與SOD摩爾比為50∶1,修飾pH為9.0,修飾溫度為室溫;優(yōu)化出超氧化物歧化酶分離-化學(xué)修飾耦合過程較好的洗脫方式有兩種:洗脫方式1是NaCl濃度梯度洗脫(0 1.0mol/L),洗脫方式2是0.15mol/LNaCl洗脫+NaCl濃度梯度洗脫(0.15 0.6mol/L)。 第四章對修飾后SOD的熱穩(wěn)定性、pH穩(wěn)定性、抗胃蛋白酶水解能力和抗胰蛋白酶水解能力進(jìn)行了考察,結(jié)果表明相比天然SOD,修飾后SOD對溫度、酸、堿、蛋白水解酶等的耐受力都有一定程度的提高。
【圖文】：

圖 1-1 游離修飾示意圖Fig 1-1 The schematic diagram of common liquid phase method for preparation of pegylatprotein圖 1-2 固相修飾示意圖

圖 1-2 固相修飾示意圖ig 1-2 The schematic diagram of solid phase adsorption method for preparationpegylated protein 利用親和色譜進(jìn)行固相修飾利用親和色譜進(jìn)行固相修飾，親和色譜的活化配基與蛋白結(jié)合，這地屏蔽修飾劑對結(jié)合部位的修飾，靶向性更強(qiáng)，，相比游離修飾，固相活性可以得到更好的保留。Baran 等分別選用 L-asparagine-Sepharose CL-4B 和 Procion red-SeB作為固相介質(zhì)對L-天門冬酰胺酶和過氧化氫酶進(jìn)行修飾。實(shí)驗(yàn)結(jié)果4
【學(xué)位授予單位】：浙江工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R341

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本文編號：2583597