【摘要】： 樹突狀細(xì)胞(dendritic cells, DC)是體內(nèi)最重要的抗原提呈細(xì)胞,而Wnt信號(hào)通路最近被證實(shí)在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮多種調(diào)控作用,本論文是關(guān)于DC中Wnt信號(hào)通路的一些研究。本實(shí)驗(yàn)從外周血中分離獲得單核細(xì)胞,體外加入細(xì)胞因子GM-CSF和IL-4誘導(dǎo)培養(yǎng)5天后獲得DC,然后以這種單核細(xì)胞來源的DC為研究對(duì)象,探討DC中Wnt通路成員表達(dá)分泌及其對(duì)DC功能的影響。 本實(shí)驗(yàn)首先通過RT-PCR的方法檢測(cè)DC中Wnt通路成員的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,在單核細(xì)胞向DC的分化過程中始終表達(dá)WNT5A配體及Wnt通路多種受體Frz1、Frz2、Frz3、Frz4、LRP6以及ROR2的mRNA,免疫熒光的結(jié)果也證實(shí)WNT5A分布在DC的整個(gè)胞漿。DC中多種Wnt通路成員的表達(dá)提示我們Wnt信號(hào)通路可能對(duì)DC的分化或功能起重要的調(diào)控作用。 SB216763可以作為經(jīng)典Wnt通路(Wnt/β-catenin信號(hào)通路)的活化劑。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,體外加入10μM的SB216763處理2-3 h后,能引起DC中β-catenin的積累活化,而β-catenin信號(hào)活化后能引起DC表型的成熟,DC的共刺激分子CD80、CD86及與T細(xì)胞作用的功能分子CD40表達(dá)的平均熒光強(qiáng)度均明顯增加,幾乎達(dá)到成熟DC的水平。但是這種DC在功能上并未成熟,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12 p40、TNF-a及趨化因子受體CCR7的表達(dá)遠(yuǎn)低于LPS促成熟的DC,甚至低于對(duì)照組未成熟DC,因此屬于一種耐受型的DC。 另外,由于DC能分泌WNT蛋白,DC中WNT蛋白的分泌機(jī)制以及可溶性差的WNT蛋白在細(xì)胞間如何運(yùn)輸,這些都沒有明確的結(jié)論。最近有研究證明,果蠅等模式生物發(fā)育過程中WNT蛋白的分泌需要Wntless和Retromer Complex的協(xié)助。為證明DC中WNT5A的分泌是否也有Wntless和Retromer Complex的參與,本實(shí)驗(yàn)利用RNAi的方法干擾Wntless分子以及Retromer Complex的關(guān)鍵亞基Vps35的表達(dá),免疫熒光結(jié)果顯示,Wntless和Vps35被干擾后DC細(xì)胞膜上WNT5A的分布明顯減少。因此本實(shí)驗(yàn)證明,Wntless和Retromer Complex參與DC中WNT蛋白的分泌過程。
【圖文】：

大部分細(xì)胞半懸浮生長(zhǎng)(圖IB)。加入LPS促成熟的DC(matureDC，mDC)形態(tài)稍微變圓，突起變少但出現(xiàn)大量毛刺，尖銳的突觸非常明顯，出現(xiàn)一些大的集落(圖IC)。圖中一些非常小而圓的顆粒為混雜的淋巴細(xì)胞，其直徑遠(yuǎn)小于10一20拜m的DC。

未加一抗;B實(shí)驗(yàn)組，，加WNTSA一抗)圖4免疫熒光檢測(cè)DC內(nèi)WNTSA的分布(x400倍)C通路中表達(dá)多種Wnt受體Frz蛋白是Wni通路的主要受體，目前哺乳動(dòng)物中己鑒定10種Frz受體S/6作為Frz受體的共受體，在經(jīng)典Wni通路中是必不可少的。最近發(fā)酸激酶受體RORZ也可以作為WNT蛋白的受體。利用Rl’-PCR的方法內(nèi)Wnt通路各種受體的表達(dá)情況，結(jié)果顯示DC表達(dá)有Frzl、FrzZ、、LRP6以及RORZ等多種Wnt受體(圖3)。RORZLRP6F『24
【學(xué)位授予單位】：華東師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王曉江;廖之君;林德馨;;DEP結(jié)構(gòu)域的功能研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年12期

2 吳玉瓊;房兵;江凌勇;;力學(xué)刺激下Wnt信號(hào)通路在促進(jìn)成骨分化中作用的研究進(jìn)展[J];組織工程與重建外科雜志;2011年03期

3 郭艷麗;郭煒;鄺鋼;楊植彬;曹延萍;董稚明;;食管鱗狀細(xì)胞癌中DICKKOPF-3基因的甲基化狀態(tài)及表達(dá)[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2011年03期

4 宋天龍;邵建國(guó);顧春燕;;Glypican3與肝癌關(guān)系的研究進(jìn)展[J];南通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2011年04期

5 劉劍雯;陳君敏;;Wnt信號(hào)通路在強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病過程中的作用[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年15期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 隋禮麗;謝志芳;張文元;劉秋燕;章衛(wèi)平;陳勇;羅坤;張明徽;萬濤;毛江森;曹雪濤;;一種新型人HAV受體的發(fā)現(xiàn)及其在HAV感染人樹突狀細(xì)胞中的作用[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

2 邵娜;紀(jì)春巖;;組蛋白去乙�；敢种苿┩ㄟ^活化Wnt信號(hào)通路抑制急性淋巴細(xì)胞白血病的研究[A];第13屆全國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)會(huì)議論文摘要[C];2011年

3 陸群;董金山;郝靖惠;段晴月;;經(jīng)典Wnt通路調(diào)控骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成牙本質(zhì)樣細(xì)胞的分化[A];全國(guó)第八次牙體牙髓病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2011年

4 金雪婷;孫愛軍;王克強(qiáng);鄒云增;葛均波;;普羅布考抑制氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)的人樹突狀細(xì)胞免疫功能成熟及作用機(jī)制研究[A];第十三次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

5 李文;林育純;陳慧峰;羅潔;李曉杰;林麗娜;胡耀明;張樹江;陳雯;林忠寧;;鋅影響鎘對(duì)體外誘導(dǎo)未成熟人樹突狀細(xì)胞的毒性作用[A];廣東省環(huán)境誘變劑學(xué)會(huì)、廣東省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)衛(wèi)生毒理專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)會(huì)議資料匯編[C];2010年

6 劉書遜;于益藝;張明徽;王聞雅;宋文剛;安華章;徐紅梅;郭振紅;曹雪濤;;TRAIL和TRAIL受體在人樹突狀細(xì)胞分化過程中的表達(dá)及其調(diào)控[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

7 佟紅艷;梅琛;李空飛;胡超;金潔;;Wnt拮抗基因在骨髓增生異常綜合征患者中甲基化水平分析[A];2011年浙江省血液病學(xué)術(shù)年會(huì)暨浙江省醫(yī)學(xué)會(huì)血液病學(xué)分會(huì)成立50周年慶典論文匯編[C];2011年

8 馬素忍;郭述良;羅永艾;;肺結(jié)核病人樹突狀細(xì)胞黏附BCG能力研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2008年全國(guó)結(jié)核病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 左瑋;王文;;莫諾苷對(duì)缺血再灌注損傷大鼠腦組織中Wnt信號(hào)通路相關(guān)因子表達(dá)的影響[A];2011全國(guó)老年癡呆與衰老相關(guān)疾病學(xué)術(shù)會(huì)議第三屆山東省神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師（學(xué)術(shù)）論壇論文匯編[C];2011年

10 張嘉;章衛(wèi)平;萬濤;張明徽;李楠;陳濤涌;隋禮麗;曹雪濤;;人樹突狀細(xì)胞來源新型死亡抵抗蛋白DRP對(duì)TNF誘導(dǎo)細(xì)胞壞死的抑制作用[A];第七屆全國(guó)腫瘤生物治療學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2001年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 楊洋;大腸癌治療性疫苗II期臨床研究獲新進(jìn)展[N];科技日?qǐng)?bào);2006年

2 記者　靖九江;我國(guó)大腸癌治療性疫苗研究獲階段結(jié)果[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

3 方彤;大腸癌治療性疫苗研究獲進(jìn)展[N];健康報(bào);2006年

4 劉云濤;治療性疫苗,離我們有多遠(yuǎn)？[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2007年

5 本報(bào)特約通訊員　 湯宏;播撒創(chuàng)新的種子[N];解放軍報(bào);2006年

6 方彤;樹突狀細(xì)胞瘤苗新進(jìn)展[N];健康報(bào);2006年

7 通訊員 肖鑫邋記者 陳青;解密甲胎蛋白精細(xì)調(diào)控機(jī)制[N];文匯報(bào);2008年

8 肖鑫;調(diào)控甲胎蛋白基因表達(dá)分子被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2008年

9 王雪飛;樹突狀細(xì)胞“面目”更清晰[N];健康報(bào);2004年

10 記者 曹繼軍邋通訊員 肖鑫;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)調(diào)控肝臟甲胎蛋白基因表達(dá)關(guān)鍵分子[N];光明日?qǐng)?bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 孫志成;SFRP2通過經(jīng)典Wnt信號(hào)通路調(diào)控增生性瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡及相關(guān)功能的機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

2 傅強(qiáng);大腸癌患者抗原致敏的人樹突狀細(xì)胞（APDC）Ⅰ期臨床研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

3 包秀麗;Wnt信號(hào)誘導(dǎo)人晶狀體上皮細(xì)胞上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化和增殖的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

4 劉娜;炎癥微環(huán)境影響下Wnt信號(hào)通路對(duì)牙周膜干細(xì)胞骨向分化的調(diào)控機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

5 沈松菲;急性白血病組蛋白甲基化和DNA甲基化的相互作用及對(duì)Wnt信號(hào)通路的調(diào)控研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

6 徐宇軍;低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6的罕見變異降低了Wnt信號(hào)通路活性并與冠心病發(fā)病相關(guān)[D];華中科技大學(xué);2012年

7 楊維霞;染料木素對(duì)糖尿病大鼠的作用和對(duì)hESCs中CD30及Wnt信號(hào)路徑中相關(guān)基因表達(dá)的影響[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2010年

8 卜獻(xiàn)民;Wnt拮抗劑SFRP1和SFRP2在胰腺癌中的異常表達(dá)及其機(jī)制[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

9 徐洪濤;Axin調(diào)控β-catenin的表達(dá)與肺癌的關(guān)系[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2006年

10 周華;針灸預(yù)處理對(duì)老年性癡呆模型大鼠Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2009年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 郭陳智;人樹突狀細(xì)胞中WNT蛋白分泌機(jī)制的初步研究[D];華東師范大學(xué);2010年

2 李鳳霞;人樹突狀細(xì)胞經(jīng)典Wnt信號(hào)通路中GSK-3β和β-catenin表達(dá)水平的研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

3 王真;經(jīng)典Wnt信號(hào)傳導(dǎo)通路在盆腔器官脫垂發(fā)病機(jī)制中的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

4 董金山;經(jīng)典WNT信號(hào)通路在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為成牙本質(zhì)樣細(xì)胞中的作用體外實(shí)驗(yàn)研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2010年

5 陶丹萍;IL-27對(duì)ox-LDL介導(dǎo)人樹突狀細(xì)胞免疫成熟作用的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

6 楊斌;紅景天甙對(duì)乙醛刺激的大鼠肝星狀細(xì)胞Wnt信號(hào)通路的影響及其意義[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

7 李大鳴;生育三烯酚通過Wnt信號(hào)途徑誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞死亡的機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2011年

8 劉燕;重組人促紅細(xì)胞生成素誘導(dǎo)人源羊水干細(xì)胞向心肌前體細(xì)胞的分化及其Wnt信號(hào)通路機(jī)制的研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

9 楊麗曉;兩條Wnt信號(hào)通路-Wnt-4/APC、β-catenin、C-myc在卵巢癌組織中的表達(dá)及其意義[D];吉林大學(xué);2010年

10 劉維;Wnt通路關(guān)鍵基因在絨山羊絨毛生長(zhǎng)一個(gè)周期中的表達(dá)研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2573702