【摘要】： 目的: 1.探討骨骼肌源性干細胞體外分離純化、培養(yǎng)、鑒定的方法,研究骨骼肌源性干細胞的生物學特性,為后續(xù)的實驗奠定基礎。 2.評估不同濃度的大腦神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)在體外誘導骨骼肌肌源性干細胞后,肌源性干細胞分化為神經(jīng)樣細胞的能力;并鑒定分化后的神經(jīng)樣細胞,為以后的神經(jīng)組織工程提供種子細胞。 方法: 1.采用Ⅺ型膠原酶和胰蛋白酶二步消化法獲取大鼠骨骼肌肌源性干細胞,微孔尼龍網(wǎng)純化肌源性干細胞后進行體外原代和傳代培養(yǎng)。觀察細胞的形態(tài),通過生長曲線、細胞融合率等指標研究骨骼肌源性干細胞的增殖與分化能力,利用免疫細胞化學染色和免疫熒光染色對所獲得的細胞進行鑒定。 2.體外提取純度較高的肌源性干細胞后,采用bFGF、EGF誘導肌源性干細胞成細胞球樣細胞團,在貼壁的情況下,用不同濃度的大腦神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)誘導分化,并檢測GFAP的表達。 結(jié)果: 1.二步消化法適用于骨骼肌肌源性干細胞細胞的獲取。通過不同直徑的微孔尼龍過濾網(wǎng)(11um,20um,30um,41um)純化骨骼肌肌源性干細胞。在生長培養(yǎng)基作用下,細胞增殖旺盛:在分化培養(yǎng)基條件下,細胞分化良好,可融合成肌管。Desmin和CD_(34)免疫細胞化學染色呈陽性。 2.次代細胞在肌源性干細胞生長培養(yǎng)液中大部分貼壁生長,少數(shù)懸浮、成團。懸浮細胞生長較快,7～15 d出現(xiàn)神經(jīng)球樣細胞團,神經(jīng)球轉(zhuǎn)入預涂有多聚賴氨酸的24孔板后,加入不同濃度的BDNF,細胞逐漸貼壁生長,呈多種細胞形態(tài):兩極長的梭形細胞;有2～3個長突起的多角形細胞;突起多而短的多角形細胞;不規(guī)則形態(tài)細胞再作GFAP免疫組化染色,GFAP(+)。GFAP陽性率隨BDNF濃度的升高而增加。 結(jié)論: 1.體外培養(yǎng)的骨骼肌肌源性干細胞具有良好的增殖與分化能力,微孔尼龍網(wǎng)過濾可純化骨骼肌肌源性干細胞。控制血清的濃度,可調(diào)節(jié)細胞的增殖與分化,骨骼肌肌源性干細胞適用于組織工程和基因治療。 2.BDNF作用于骨骼肌肌源性干細胞,可使細胞向神經(jīng)樣細胞方向分化;骨骼肌肌源性干細胞不僅為骨缺損修復、肌萎縮、心肌梗死、壓力性尿失禁等的治療帶來新的曙光,還可用來移植治療神經(jīng)系統(tǒng)的疾病。
【圖文】：

山東大學碩士學位論文附圖圖1一1.剛分離出的肌源性干細胞 (X100)圖1一2.第3天完全貼壁的肌源性干細胞(X200)圖1一3.第4天肌源性干細胞伸出多個突起 (X200)

山東大學碩士學位論文附圖圖1一1.剛分離出的肌源性干細胞 (X100)圖1一2.第3天完全貼壁的肌源性干細胞(X200)圖1一3.第4天肌源性干細胞伸出多個突起 (X200)
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：2555689