【摘要】： 目的:探討廣西巴馬縣人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度隨年齡變化的規(guī)律,分析該地區(qū)人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度隨年齡增加而縮短的速度是否比非長壽地區(qū)人群緩慢,比較該地區(qū)人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度是否比非長壽地區(qū)人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度長,從而探索巴馬長壽現(xiàn)象是否與端粒有關(guān)。 方法:1、建立端粒DNA長度的檢測(cè)方法:地高辛探針標(biāo)記的Southern blot方法。2、收集49例廣西巴馬縣健康人群(實(shí)驗(yàn)組)外周血樣和51例廣西非長壽地區(qū)健康人群(對(duì)照組)外周血樣,將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組按年齡分為四組,分別為:青年組(35歲),中年組(≥35歲,64歲),老年組(≥64歲,85),長壽組(≥85)。運(yùn)用地高辛探針標(biāo)記的Southern blot方法測(cè)量人群外周血白細(xì)胞端粒DNA限制性酶切片斷(TRF)長度。3、使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。 結(jié)果:1、優(yōu)化地高辛探針標(biāo)記的Southern blot方法,確定樣品DNA最佳上樣量為1.5μg,最佳酶切時(shí)間為2h。測(cè)量對(duì)照樣品端粒DNA長度,結(jié)果分別為3.9Kb、10.2Kb。2、對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度與年齡作相關(guān)與回歸分析,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組年齡與外周血白細(xì)胞端粒DNA長度線性關(guān)系良好,兩組的相關(guān)系數(shù)分別為-0.944與-0.942,回歸方程分別為Y=11.888-0.044X、Y=11.141-0.045X (X為年齡,Y為端粒長度),比較兩個(gè)方程的回歸系數(shù),t=0.32(P 0.05),差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3、以年齡為協(xié)變量,對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組外周血白細(xì)胞端粒DNA長度作協(xié)方差分析,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05),實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組端粒DNA長度不同,且實(shí)驗(yàn)組端粒DNA長度較長。4、對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組內(nèi)部各個(gè)年齡組外周血白細(xì)胞端粒DNA長度做方差分析,結(jié)果顯示兩組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05),實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組內(nèi)部各年齡組之間的端粒DNA長度均有差異,年齡越大的組別端粒DNA長度越短。5、對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間不同年齡組外周血白細(xì)胞端粒DNA長度做t檢驗(yàn),結(jié)果顯示除青年組的差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05),中年組、老年組、長壽組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05),實(shí)驗(yàn)組人群端粒DNA長度在中年組、老年組、長壽組均比對(duì)照組人群端粒DNA長度長。6、對(duì)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組內(nèi)部不同性別端粒DNA長度進(jìn)行比較,結(jié)果顯示兩組差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P 0.05),尚不能認(rèn)為不同性別人群的外周血白細(xì)胞端粒DNA長度有差異。 結(jié)論:1、廣西巴馬和廣西非長壽地區(qū)人群的外周血白細(xì)胞端粒DNA長度均與年齡呈負(fù)相關(guān),但尚不能認(rèn)為兩組人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度隨年齡增大而縮短的速度不同。2、廣西巴馬人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度比廣西非長壽地區(qū)人群外周血白細(xì)胞端粒DNA長度長。3、廣西巴馬和廣西非長壽地區(qū)不同性別人群的外周血白細(xì)胞端粒DNA長度尚不能認(rèn)為有差異。
【圖文】：

圖 1 端粒長度測(cè)定的流程圖Fig. 1 Experimental scheme of the TeloTAGGG Telomere Length Assay.3.1 樣品酶切將 DNA 樣品在 4℃以 13000r/min 離心 5min，放置于冰上待用。取 inf I 和 6μl Rsa I 酶充分混合，放置于冰上待用。每個(gè) DNA 樣品取合適度，用 nuclease-free water 加至總?cè)莘e 17μl。取 10μl control-DNA low0μl control-DNA high，，分別加入 7μl 的 nuclease-free water 至總?cè)莘e 17μ有的樣品和對(duì)照均加入 2μl digestion buffer 和 1μl 混合酶，12000r/min 10s。37℃水浴孵育合適的時(shí)間。每管各加入 4μl loading buffer2000r/min 離心 10s。以上所有步驟均在冰上進(jìn)行。.3.2 電泳

20樣品不同加樣量端粒 DNA 長度測(cè)定結(jié)果的miluminescent detection of TRF in different c：1、1.0μg; 2、1.5μg; 3、2.0μg; M、Mark切時(shí)間端粒 DNA 長度測(cè)量結(jié)果如、2h、12h，當(dāng)酶切時(shí)間為 1h，時(shí)間為 2h 時(shí)，其所得譜帶更加其所得譜帶與酶切時(shí)間為 2h 的擇酶切時(shí)間為 2h 最佳。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2551007