【摘要】：目的:進(jìn)行兔ADSCs的分離、體外培養(yǎng),并觀察ADSCs的體外生長(zhǎng)的特性及多向分化潛能,為骨組織工程的進(jìn)一步研究做準(zhǔn)備。方法:將取得的脂肪組織充分剪碎,消化、離心后,將細(xì)胞懸液置于培養(yǎng)皿中,在培養(yǎng)箱中培養(yǎng),獲得原代細(xì)胞,并進(jìn)行傳代培養(yǎng),觀察體外增殖能力。選取第3代細(xì)胞,進(jìn)行成脂誘導(dǎo),進(jìn)行油紅O染色。選取第3代ADSCs,加入成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)基,并設(shè)置加入基礎(chǔ)培養(yǎng)基的為陰性對(duì)照,進(jìn)行ALP、茜素紅、Von Kossa染色。通過免疫熒光和RT-PCR檢測(cè)ALP、OPN、OCN和ONN的表達(dá)。結(jié)果:脂肪干細(xì)胞接種24h后,可見少數(shù)較大的細(xì)胞開始貼壁,為大而扁平的單層細(xì)胞。48h后大多數(shù)細(xì)胞貼壁,呈梭形,有粗大突起。5-7天后,細(xì)胞逐漸分裂、融合成單層。傳代后細(xì)胞呈梭形,核居中。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線示在第3～7天細(xì)胞進(jìn)入快速增殖期。成脂誘導(dǎo)后,油紅O染色證實(shí)細(xì)胞內(nèi)有脂滴形成。成骨誘導(dǎo)后進(jìn)行ALP、茜素紅、Von Kossa染色結(jié)果均為陽性,通過免疫熒光和RT-PCR檢測(cè),ALP、OPN、OCN和ONN均有表達(dá)。結(jié)論:利用原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可成功地從兔脂肪組織中分離出目的細(xì)胞,并進(jìn)行體外培養(yǎng)及傳代。在誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用下兔脂肪干細(xì)胞可分化為成骨細(xì)胞及成脂肪細(xì)胞。
【圖文】：

b. 加適當(dāng)體積的 0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶解 RNA，保存于-80oC 冰。結(jié) 果ADSCs 鏡下形態(tài)觀察細(xì)胞接種時(shí)，含有較多的脂滴、少量紅細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等雜質(zhì)，接種約4肪干細(xì)胞開始貼壁，隨著細(xì)胞貼壁后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，換液次數(shù)的增加，這細(xì)胞可以基本被清除。接種 24h 后，可見多數(shù)的細(xì)胞開始貼壁，倒置顯微鏡壁的細(xì)胞呈圓形、橢圓形或梭形，為大而扁平的單層細(xì)胞。有的細(xì)胞體細(xì)長(zhǎng)纖維細(xì)胞。48h 后貼壁細(xì)胞增多，貼壁細(xì)胞形態(tài)多樣、分布不均，部分呈巢，細(xì)胞向四周伸展，邊緣的細(xì)胞呈梭形，散在生長(zhǎng)的細(xì)胞呈橢圓形或梭形，的細(xì)胞個(gè)體較大，胞質(zhì)中顆粒明顯，并開始伸展，分裂，呈梭形，有粗大突7 天后，細(xì)胞逐漸分裂、融合成單層，成簇分布。傳代后細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)。（見圖 1~圖 5 倒置相差顯微鏡下對(duì) ADSCs 的形態(tài)觀察）

b. 加適當(dāng)體積的 0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶解 RNA，保存于-80oC 冰。結(jié) 果ADSCs 鏡下形態(tài)觀察細(xì)胞接種時(shí)，含有較多的脂滴、少量紅細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等雜質(zhì)，，接種約4肪干細(xì)胞開始貼壁，隨著細(xì)胞貼壁后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，換液次數(shù)的增加，這細(xì)胞可以基本被清除。接種 24h 后，可見多數(shù)的細(xì)胞開始貼壁，倒置顯微鏡壁的細(xì)胞呈圓形、橢圓形或梭形，為大而扁平的單層細(xì)胞。有的細(xì)胞體細(xì)長(zhǎng)纖維細(xì)胞。48h 后貼壁細(xì)胞增多，貼壁細(xì)胞形態(tài)多樣、分布不均，部分呈巢，細(xì)胞向四周伸展，邊緣的細(xì)胞呈梭形，散在生長(zhǎng)的細(xì)胞呈橢圓形或梭形，的細(xì)胞個(gè)體較大，胞質(zhì)中顆粒明顯，并開始伸展，分裂，呈梭形，有粗大突7 天后，細(xì)胞逐漸分裂、融合成單層，成簇分布。傳代后細(xì)胞呈梭形，細(xì)胞纖維細(xì)胞樣生長(zhǎng)。（見圖 1~圖 5 倒置相差顯微鏡下對(duì) ADSCs 的形態(tài)觀察）
【學(xué)位授予單位】：新疆醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

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本文編號(hào)：2536971