【摘要】：心肌梗死會導致心肌細胞的喪失、心肌纖維化和心室重構,隨之而來的心腔擴大和神經激素系統(tǒng)激活,特別是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的激活,引起心肌功能的進行惡化,最終發(fā)展為心力衰竭。本研究通過結扎大鼠冠狀動脈建立心肌梗死誘導的心力衰竭模型,觀察liguzinediol對各組大鼠心功能的保護作用,明確其對心衰后腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、炎癥、氧化應激以及心室重構的影響,并探討藥物對TGF-β1/Smads通路的作用,旨在為liguzinediol臨床用于心衰的治療提供實驗基礎。方法與結果：1. Liguzinediol對心梗致心衰大鼠心功能的影響用結扎冠狀動脈方法復制大鼠由心肌梗死導致的充血性心力衰竭模型。設假手術組,模型組,liguzinediol低、中、高劑量(5、10、20 mg·kg-1)組及陽性藥(Captopril 10 mg·kg-1, Digoxin 0.032mg·kg-1)組。造模2周后測超聲心動圖,將EF55%的大鼠隨機分到除假手術之外的各組,開始灌胃給藥,8周后測各組大鼠超聲心動圖。觀察指標為：射血分數(shù)(EF)、左心室短軸縮短率(LVFS)、舒張期左心室容量(LV Vol;d)、收縮期左心室容量(LV Vol;s),每搏輸出量(SV)和每分輸出量(Co)。隨后記錄血流動力學,觀察指標為左心室收縮壓(LVSP)、左心室舒張末期壓(LVEDP)、左室內壓最大上升速率(+dp·dtmax-1)、左室內壓最大下降速率(-dp·dtmax-1)、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)和平均動脈壓(MAP)。結果表明冠脈結扎致心衰模型大鼠的EF、LVFS、SV、CO和LVSP、±idp·dtmax-1、SBP、DBP、MAP均明顯下降,LV Vol;s、LV Vol;d和LVEDP均明顯升高。用Liguzinediol 5、10、20 mg·kg-1治療2個月后模型大鼠組EF、LVFS、CO、LVSP、±dp·dtmax-1、SBP、DBP、MAP均明顯升高,LVEDP明顯下降,10、20 mg·kg-1還可升高SV,此外20 mg·kg-1可抑制LV Lol;s的升高。2. Liguzinediol對心梗致心衰大鼠RAAS、促炎癥因子和氧化應激的影響檢測血流動力學之后取血,分別留取血清、血漿及心肌組織,其中用放射免疫法檢測血漿中血管緊張素II(Ang Ⅱ)、醛固酮(ALD)和腎素活性(PRL1)含量。結果表明冠脈結扎模型組大鼠PRL、ALD、Ang Ⅱ均顯著升高,而給藥后各組PRL、ALD、Ang Ⅱ均降低,尤以是Captopril以及l(fā)iguzinediol 20 mg·kg-1組最為明顯。用放射免疫法檢測血清中白介素-1p(IL-1β)和白介素-6(IL-6)含量,用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)含量,結果顯示冠脈結扎模型組大鼠血清中IL-6、IL-1β和TNF-α均明顯增高,而給藥后均能不同程度降低三者含量,尤其是Digoxin口liguzinediol 20 mg·kg-1組作用更為明顯。WST。1法檢測留取心肌組織中超氧化物岐化酶(SOD)含量,TBA法檢測心肌組織中丙二醛(MDA)含量,結果表明心衰模型心肌組織中SOD含量明顯減少,MDA明顯增多,給藥后liguzinediol各劑量組均能升高SOD含量,降低MDA水平。3. Liguzinediol對心梗致心衰大鼠心室重構的影響稱重心臟和左心室重量,計算心臟質量指數(shù)(HMI)和左心室質量指數(shù)(LVMI);HE染色、Masson染色光鏡觀察心肌細胞及心肌細胞外基質結構,透射電鏡觀察心肌細胞超微結構；酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清I型膠原及III型膠原含量；堿水解法檢測心肌組織中羥脯氨酸(HYP)含量；Western blot法檢測心肌組織中基質金屬蛋白酶2(MMP2)、基質金屬蛋白酶9(MMP9)和金屬蛋白酶組織抑制劑1(TIMP1)的蛋白表達。結果顯示,模型組HMI、LVMI均升高,給藥后各組HMI和LVMI均降低,尤其lliguzinediol 20 mg·kg-1組降低明顯；HE染色中,模型組心肌細胞重度變性壞死；同時透射電鏡觀察的超微結構顯示模型組線粒體腫脹、破裂,形成空泡,嵴斷裂,散在分布,肌原纖維溶解,排列紊亂,基質密度降低,細胞間隙擴大；在Masson染色中,模型組可見藍色膠原沉積明顯增多,IOD值也明顯升高；模型組Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原、Ⅰ/Ⅲ型膠原的比例及HYP含量均升高,表明模型組細胞外基質重構明顯,膠原沉積急劇增加,纖維化程度顯著。在給予liguzinediol之后,各劑量組均能不同程度地減輕心肌細胞壞死、線粒體破裂及肌纖維溶解現(xiàn)象,改善心肌纖維化,尤其以高劑量組作用最為明顯。模型組MMP-2、MMP-9和TIMP-1均明顯升高,在給予liguzinediol5、10、20 mg·kg-1治療后MMP-2、MMP-9和TIMP-1均降低,以liguzinediol 20 mg·kg-1組降低最為顯著。4. Liguzinediol對心梗致心衰大鼠心肌組織TGF-β1/Smads通路的影響ELISA法檢測血清中TGF-p含量；Western blot法檢測心肌組織中TGF-β1/Smad2/Smad3/Smad7/Endoglin蛋白表達；Real-time PCR法檢測心肌組織中TGF-β1/Smad2/Smad3/Smad7/Endoglin mRNA水平。實驗結果表明,模型組血清中TGFβ1含量明顯升高,同樣升高的還有心肌組織中TGFβ1、Smad2、Smad3、Smad7、Endoglin的蛋白及mRNA表達,給予liguzinediol后,血清中TGFβ1含量下降,心肌組織中TGFβ1、 Smad2、Smad3、Smad7、Endoglin的蛋白及]mRNA表達均明顯降低。結論：對于心梗致心衰大鼠,liguzinediol對心功能有重要保護作用,可通過抑制RAAS系統(tǒng)過度激活,減少促炎癥因子釋放,減輕氧化應激反應,以及改善病理性心室重構來恢復衰竭心臟的舒縮功能,且其作用機制可能與TGF-β/Smads通路有關。
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R965;R-332

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本文編號：2521423