【摘要】： 重組表位疫苗(Recombinant epitope vaccine)研制和開(kāi)發(fā)過(guò)程主要包括構(gòu)建表達(dá)、制備及活性研究等幾個(gè)階段。圍繞以上三個(gè)方面,針對(duì)重組表位疫苗CZ-1、HSP65-MUC1和HSP65-HER2進(jìn)行了以下研究:1、使用分子生物學(xué)軟件對(duì)AsiaⅠ型口蹄疫病毒的VP1上的B細(xì)胞表位和Th細(xì)胞表位進(jìn)行了多參數(shù)預(yù)測(cè),根據(jù)預(yù)測(cè)結(jié)果在大腸桿菌內(nèi)構(gòu)建表達(dá)了由相同B細(xì)胞表位及Th細(xì)胞表位以串聯(lián)模式組成口蹄疫重組表位疫苗CZ-1,采用層析法純化、復(fù)性后,對(duì)其免疫豚鼠后產(chǎn)生中和抗體的滴度進(jìn)行了測(cè)定;2、解決了HSP65-MUC1的降解問(wèn)題,建立了重組表位疫苗HSP65-MUC1的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模純化工藝,并將純化工藝放大至中試規(guī)模后,且對(duì)純化后的HSP65-MUC1原液凍干品進(jìn)行了一系列的質(zhì)量檢測(cè);3、表達(dá)并純化了重組表位疫苗HSP65-HER2,采用小鼠B16/HER2黑色素瘤的腹腔荷瘤動(dòng)物模型研究其生物學(xué)活性,并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探索。 本研究的意義在于,構(gòu)建、表達(dá)、純化獲得了重組表位疫苗CZ-1,并對(duì)其生物學(xué)活性進(jìn)行了研究,證實(shí)其有望開(kāi)發(fā)成預(yù)防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗,并為其他同類(lèi)型的重組表位疫苗的開(kāi)發(fā)提供了思路;解決了HSP65-MUC1在制備過(guò)程中易降解的技術(shù)難題,建立了HSP65-MUC1的中試工藝,為進(jìn)一步臨床試驗(yàn)及商業(yè)化應(yīng)用建立了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ);通過(guò)小鼠體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn),證實(shí)了HSP65-HER2與CpG ODN聯(lián)合應(yīng)用對(duì)HER2陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用,為進(jìn)一步的研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The research and development of recombinant epitope vaccine (Recombinant epitope vaccine) mainly includes construction, expression, preparation and activity research. Around the above three aspects, the following studies were carried out on recombinant epitope vaccines CZ-1,HSP65-MUC1 and HSP65-HER2: 1. The B cell epitopes and Th cell epitopes on VP1 of Asia type I foot-and-mouth disease virus were predicted by molecular biology software. According to the predicted results, the recombinant epitope vaccine CZ-1, composed of the same B cell epitope and Th cell epitope was constructed and expressed in E. coli. After purification by chromatography and renaturation, the titer of neutralizing antibody produced by immunizing guinea pigs was determined. 2. The degradation problem of HSP65-MUC1 was solved, and the laboratory scale purification process of recombinant epitope vaccine HSP65-MUC1 was established, and the purification process was enlarged to the pilot scale, and a series of quality tests were carried out on the purified HSP65-MUC1 freeze-dried products. 3. The recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was expressed and purified. The biological activity of the recombinant epitope vaccine HSP65-HER2, was studied in the abdominal cavity tumor-bearing animal model of mouse B16/HER2 melanoma, and its mechanism was preliminarily explored. The significance of this study is to construct, express and purify the recombinant epitope vaccine CZ-1, and study its biological activity, which proves that it is expected to be developed into a new type of vaccine to prevent Asia I FDMV infection, and provides ideas for the development of other recombinant epitope vaccines of the same type. The technical problems of easy degradation of HSP65-MUC1 in the preparation process were solved, and the pilot-scale test process of HSP65-MUC1 was established, which established a solid foundation for further clinical trial and commercial application, and confirmed the inhibitory effect of HSP65-HER2 and CpG ODN on the growth of HER2 positive tumor cells through in vivo tumor inhibition test, which laid a foundation for further research.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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1 趙r嚺，

本文編號(hào)：2509241