【摘要】：目的研究原核表達的登革病毒(dengue virus,DV)1-4型融合的E蛋白結構域III直接抑制登革病毒感染及其抗體的中和作用;研究rEIII融合蛋白在昆蟲表達系統(tǒng)的分泌表達情況,探討不同表達系統(tǒng)對融合蛋白功能的影響。 方法①通過連接肽將1-4型登革病毒包膜蛋白Ⅲ區(qū)串聯起來,將串聯基因產物插入PET30a在大腸桿菌中進行表達、純化后,應用Western blot及間接ELISA驗證表達產物。將融合蛋白新西蘭大白兔制備免疫血清,應用間接免疫熒光檢測以確定多抗血清的活性。將融合蛋白及多抗血清分別進行阻斷實驗和中和實驗,對抗原及抗體的功能進行研究。②將rEIII基因克隆到桿狀病毒表達載體pAcSecG2T上,轉染SF9細胞,傳代增強毒力,間接免疫熒光結果顯示,融合蛋白在昆蟲表達系統(tǒng)中傳代5代后表達明顯增強,分別收集細胞及細胞培養(yǎng)液.ELISA及Western blot檢測融合蛋白分泌表達情況。 結果在大腸桿菌中成功表達了串聯的登革病毒1～4型E蛋白結構域III融合蛋白,并得到兔抗免疫血清,分別對融合蛋白及兔抗免疫血清進行驗證,進行了一系列功能試驗。融合蛋白能夠阻斷1-4型DV感染,兔抗免疫血清能中和1-4型DV,但中和抗體效價不同。同時利用昆蟲表達系統(tǒng)表達純化了真核rEIII融合蛋白,為以后登革病毒抗原表位的篩選和疫苗研究打下了基礎。 結論串聯表達的登革病毒包膜蛋白Ⅲ區(qū)可抑制登革病毒感染,串聯rEⅢ蛋白免疫新西蘭大白兔產生的針對DV1-4型包膜蛋白結構域Ⅲ區(qū)的抗體對登革病毒具有中和作用。融合蛋白可以在昆蟲表達系統(tǒng)細胞內高表達,但極少分泌。
[Abstract]:Objective to study the direct inhibition of dengue virus (dengue virus,DV) infection and neutralization of antibodies by the fusion of E protein domain III of prokaryotic expression of dengue virus (dengue virus,DV) 1-4. To study the secretory expression of rEIII fusion protein in insect expression system and the effect of different expression system on the function of the fusion protein. Methods 1Recombinant peptide was used to connect the 1-4 dengue virus envelope protein 鈪，

本文編號：2406643