【摘要】：在晚分泌期由于黃體功能的下降導致體內(nèi)孕酮水平的降低稱為孕酮撤退,孕酮撤退導致子宮內(nèi)膜細胞經(jīng)歷一系列生化和細胞水平上的變化,最后發(fā)生凋亡和崩解,造成子宮內(nèi)膜的出血和脫落,即所謂的月經(jīng)發(fā)生。 根據(jù)月經(jīng)發(fā)生是否可被孕酮所逆轉(zhuǎn)可將月經(jīng)分為兩個階段：可被孕酮逆轉(zhuǎn)的可逆階段和和不可被孕酮逆轉(zhuǎn)的不可逆階段。前者為孕酮控制的信號通路,后者作為前者的后續(xù)階段則觸發(fā)了一系列組織崩解的作用因子。兩階段涉及完全不同的信號通路和級聯(lián)反應(yīng)體系。在人和靈長類解析上述分子機制有種種限制,因而如何獲得適宜于進行活體研究的、廉價、易于操作的,特別是適合解析分子機理的動物模型是闡明月經(jīng)發(fā)生機制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。因此確定小鼠月經(jīng)模型中孕酮逆轉(zhuǎn)的關(guān)鍵時期對于解析月經(jīng)發(fā)生機制具有十分重要的意義。對此,我們進行了一些有益的探索,結(jié)果如下： 1.通過陰道細胞學監(jiān)測出血和組織形態(tài)學鑒定,成功確定了小鼠生理性孕酮撤退月經(jīng)模型中能被孕酮逆轉(zhuǎn)的關(guān)鍵時期為孕酮撤退后的12-16h。 2.通過全基因組表達譜分析,比較小鼠生理性孕酮撤退模型中關(guān)鍵時期孕酮回植與孕酮撤退12h及16h的基因表達變化,找出差異表達基因,為后續(xù)研究提供導向。 3.在基因芯片數(shù)據(jù)的指導下,選擇了MMP家族的主要成員、環(huán)氧合酶-2(COX-2)、VEGF作為研究的靶分子,從mRNA、蛋白水平及蛋白表達定位幾個層面,探討了在月經(jīng)發(fā)生的關(guān)鍵時期內(nèi)表達水平的變化,并比較了在關(guān)鍵時期前后回植孕酮對這些分子表達的影響。結(jié)果表明： 在月經(jīng)發(fā)生的早期階段,孕酮回植可以降低MMP-3、MMP-10、MMP-11MMP-13及COX-2mRNA和蛋白表達。 在月經(jīng)發(fā)生的晚期,在關(guān)鍵時期前的12h回植孕酮,MMP-2、MMP-3、MMP-9、MMP-10、MMP-11、MMP-13和COX-2的mRNA和蛋白都受到強烈抑制；而關(guān)鍵時期后的16h回植孕酮則只能部分或不能減少這些MMP分子和COX-2的mRNA和蛋白的表達。 MMP-7的mRNA和蛋白表達不能被孕酮回植所抑制。提示MMP-7可能和小鼠子宮內(nèi)膜的崩解無關(guān)。 VEGF mRNA和蛋白表達不受孕酮回植與否的影響,與其蛋白在小鼠子宮內(nèi)膜的組織表達定位結(jié)果不符,這可能和VEGF表達的瞬時性增加有關(guān)。 4.探討了孕酮回植對小鼠子宮內(nèi)膜基質(zhì)細胞凋亡的影響,發(fā)現(xiàn)在月經(jīng)發(fā)生的關(guān)鍵時期之前的12h回植孕酮可以有效阻斷子宮內(nèi)膜細胞的凋亡,而關(guān)鍵時期之后的16h則不能起到阻斷效應(yīng)。同時分析了孕酮對凋亡相關(guān)基因p53、mdm2、bcl-2、bax、fas、caspase-3及caspase-8的mRNA和蛋白水平的表達的影響,初步證實孕酮回植的抗凋亡效應(yīng)可能通過上調(diào)bcl-2/bax的比值從而抑制caspase-3表達有關(guān)。
[Abstract]:In the late secretory phase, progesterone level decreases due to the decrease of luteal function, which is called progesterone withdrawal. Progesterone withdrawal causes endometrial cells to undergo a series of biochemical and cellular changes, and finally apoptosis and disintegration occur. Causes endometrial bleeding and shedding, known as menstruation. According to whether menstruation can be reversed by progesterone, menstruation can be divided into two stages: reversible phase that can be reversed by progesterone and irreversible phase that can not be reversed by progesterone. The former is a progesterone-controlled signaling pathway, and the latter, as a follow-up stage, triggers a series of factors of tissue disintegration. The two stages involve completely different signal pathways and cascade reaction systems. In humans and primates, there are many limitations to understanding these molecular mechanisms, so how to get cheap, easy to operate, suitable for in vivo research, Especially the animal model which is suitable to explain the molecular mechanism is one of the key links to elucidate the mechanism of menstrual cycle. Therefore, it is very important to determine the key period of progesterone reversal in mouse menstrual model for elucidating the mechanism of menstruation. To this, we have carried on some beneficial exploration, the result is as follows: 1. By means of vaginal cytological monitoring and histomorphology identification, the key period of physiological progesterone withdrawal menstrual model in mice was determined to be 12-16 hours after progesterone withdrawal. 2. By analyzing the whole genome expression profile, we compared the gene expression changes between progesterone replantation and progesterone retreating 12h and 16h in the key period of mouse physiologic progesterone withdrawal model, and found the differentially expressed genes, which provided guidance for further study. 3. Under the guidance of gene chip data, the main member of the MMP family, cyclooxygenase-2 (COX-2), VEGF), was selected as the target molecule to locate the mRNA, protein level and protein expression. The changes of expression levels during the critical period of menstruation were studied, and the effects of progesterone reimplantation on the expression of these molecules were compared before and after the critical period. The results showed that progesterone reimplantation could decrease the expression of MMP-3,MMP-10,MMP-11MMP-13, COX-2mRNA and protein in the early stage of menstruation. At the late stage of menstruation, the reimplantation of progesterone, mRNA and protein of MMP-2,MMP-3,MMP-9,MMP-10,MMP-11,MMP-13 and COX-2 were strongly inhibited 12 hours before the critical period. However, the reimplantation of progesterone at 16 hours after the critical period could only partially or cannot reduce the expression of mRNA and protein of these MMP molecules and COX-2. The expression of mRNA and protein in MMP-7 could not be inhibited by progesterone replantation. The results suggest that MMP-7 may not be related to the disintegration of mouse endometrium. The expression of VEGF mRNA and protein was not affected by progesterone reimplantation or not, which was not consistent with the localization of VEGF mRNA protein in mouse endometrium, which might be related to the transient increase of VEGF expression. 4. The effect of progesterone reimplantation on apoptosis of mouse endometrial stromal cells was studied. It was found that the reimplantation of progesterone 12 hours before the critical period of menstruation could effectively block the apoptosis of endometrial cells. However, 16 hours after the critical period did not play a blocking effect. At the same time, the effect of progesterone on the expression of mRNA and protein of apoptosis-related gene p53 mdm2mdm2bcl-2baxanfascaspase-3 and caspase-8 was analyzed. It was preliminarily confirmed that the anti-apoptotic effect of progesterone replantation may inhibit the expression of caspase-3 by upregulating the ratio of bcl-2/bax.
【學位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學院
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R-332

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本文編號：2400775