【摘要】： Ⅱ型單純皰疹病毒(Herpes simplex virus 2,HSV-2)感染可造成一種常見而古老的性傳播疾病——生殖器皰疹,其發(fā)病率在性病中僅次于淋病和梅毒。在HSV-2的11種糖蛋白中gD能誘導產(chǎn)生相對較高的中和抗體水平,gB可誘導產(chǎn)生中和抗體并能引起細胞毒性T細胞反應,因此成為亞單位疫苗的首選。 糖蛋白B (glycoprotein B,gB)作為單純皰疹病毒兩個血清亞型的共有外膜蛋白,在維持病毒形態(tài)及病毒進入縮主細胞起著非常重要的作用。人及動物接種gB可誘發(fā)高水平的中和抗體并可以引起保護性T細胞免疫反應。因此,選取HSV-2 gB全基因序列利用生物學軟件對B及HLA-A*0201限制性T細胞表位進行了預測,所篩選的B細胞中和表位能在小鼠體內誘發(fā)高水平的抗體,并且以介導Th2型免疫反應的IgG1亞型為主。同時,這兩個B細胞中和表位誘發(fā)的抗體能特異性中和病毒(感染)。另外,利用免疫學方法檢測從gB上篩選的T細胞表位是否能夠刺激T2細胞表面穩(wěn)定地產(chǎn)生HLA-A*0201復合物;篩選的T細胞表位在體內/外是否能夠刺激產(chǎn)生有效的IFN-γ及有效的CD8+T細胞的殺傷作用。結果顯示,預測的T細胞表位可以刺激T2細胞穩(wěn)定產(chǎn)生HLA-A*0201復合物,并可以刺激T細胞分泌IFN-γ與CD8+T細胞毒作用。 以HSV-2 333株的基因組DNA為模板擴增編碼HSV-2糖蛋白D(glycoprotein D,gD)基因,與載體pFastBacⅠ連接,轉化E.coil DH5α感受態(tài)細胞,經(jīng)PCR及測序鑒定正確。將pFastBacⅠ-gD重組質粒轉座至DH10Bac獲得重組穿梭質粒,轉染Sf9昆蟲細胞,獲得重組桿狀病毒。重組桿狀病毒感染Sf9細胞表達重組蛋白,經(jīng)對表達條件進行優(yōu)化,SDS-PAGE和Western blot鑒定,成功表達了HSV-2 gD蛋白。為下一步的工作奠定了基礎。
[Abstract]:Herpes simplex virus type 鈪，

本文編號：2393481