【摘要】： 目的:隨著神經-內分泌-免疫相互作用研究的不斷深入,目前已知在淋巴細胞上具有α-和β-腎上腺素受體,并且它們都參與調節(jié)免疫細胞功能。然而,盡管已有文獻報道淋巴細胞上也存在多巴胺(dopamine, DA)受體,但關于T淋巴細胞上存在哪種亞型DA受體,以及這些受體在介導T細胞功能調節(jié)中的作用尚不十分清楚。因此,本研究旨在一方面提供T淋巴細胞表達DA兩類亞型受體  D1-like受體(包括D1和D5受體)和D2-like受體(包括D2、D3、D4受體)的證據,另一方面探討D1-like受體和D2-like受體在介導T細胞功能調節(jié)中的作用及其信號轉導分子,從而為神經-內分泌-免疫調節(jié)網絡增加新內容。 方法:取小鼠腸系膜淋巴結細胞,用尼龍毛柱粘附法分離和純化T淋巴細胞,應用流式細胞術檢測T細胞的純度。用逆轉錄-聚合酶鏈反應(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)法檢測T淋巴細胞的各種亞型DA受體mRNA表達。淋巴細胞用各種濃度的D1-like受體激動劑、拮抗劑或D2-like受體激動劑、拮抗劑孵育48 h,然后應用噻唑蘭(methyl-thiazole-tetrazolium, MTT)比色法檢測淋巴細胞對有絲分裂原  刀豆蛋白A(concanavalin A, Con A)誘導的增殖反應;應用流式蛋白分析系統(tǒng)測定經Con A刺激的淋巴細胞培養(yǎng)物的上清液中細胞因子干擾素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、腫瘤壞死因子(tumornecrosisfactor,TNF)和白介素-4(interleukin-4,IL-4)的濃度;應用125I-環(huán)一磷酸腺苷(125I-cAMP)放射免疫法檢測淋巴細胞內環(huán)一磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)的含量。 結果:腸系膜淋巴結細胞經分離和純化后,獲得的CD3+淋巴細胞(即T淋巴細胞)在腸系膜淋巴結細胞中的百分比為93.8±0.53%,明顯高于未經分離和純化的腸系膜淋巴結細胞中的T細胞百分比74.1±0.95%,說明用上述方法已獲得純化的T淋巴細胞。T淋巴細胞可表達所有DA亞型受體mRNA,包括D1-like受體的D1和D5受體,及D2-like受體的D2、D3、D4受體。淋巴細胞分別用5個濃度的D1-like受體激動劑SKF38393(10-9～10-5 M)處理后,細胞對Con A誘導的增殖反應均沒有發(fā)生明顯的改變。用Con A刺激的淋巴細胞經SKF38393(10-8 M)處理后,IFN-γ的產生顯著低于未經SKF38393處理的淋巴細胞,但TNF和IL-4的產生沒有明顯改變。D1-like受體拮抗劑SCH23390(10-7 M)能阻斷激動劑SKF38393(10-8 M)對淋巴細胞產生IFN-γ的抑制作用。D1-like受體激動劑、拮抗劑或激動劑與拮抗劑一起處理淋巴細胞,均沒有明顯影響淋巴細胞內cAMP的含量。上述結果說明,D1-like受體在介導T細胞功能調節(jié)中不起主導作用。然而,淋巴細胞分別用5個濃度的D2-like受體激動劑quinpirole(10-9～10-5 M)處理后,細胞對Con A誘導的增殖反應均明顯減弱。用不同濃度的D2-like受體拮抗劑haloperidol(10-10～10-7 M)與激動劑quinpirole(10-8 M或10-7 M)一起處理淋巴細胞,haloperidol呈現(xiàn)濃度依賴性地阻斷quinpirole對T細胞增殖的抑制作用。quinpirole(10-8 M)可抑制Con A刺激的T細胞生成IFN-γ和TNF,但促進T細胞生成IL-4。haloperidol(10-7 M)能阻斷quinpirole抑制T細胞生成IFN-γ和TNF的作用,及阻斷quinpirole促進T細胞生成IL-4的作用。上述結果充分說明D2-like受體介導調節(jié)T細胞的功能。此外,quinpirole(10-8 M和10-7 M)可導致Con A激活的T細胞內cAMP含量明顯減少,haloperidol(10-8 M和10-7 M)則可阻斷quinpirole減少淋巴細胞內cAMP的作用,提示cAMP參與D2-like受體介導的T淋巴細胞功能調節(jié)。 結論:T淋巴細胞能表達各種DA亞型受體  D1、D5受體(即D1-like受體)及D2、D3、D4受體(即D2-like受體)。在D1-like和D2-like兩型DA受體中,D2-like受體是介導T淋巴細胞功能調節(jié)的主要受體,它的激活能抑制T淋巴細胞的增殖、減少細胞因子IFN-γ和TNF的生成及增加IL-4的生成,D2-like受體的這些作用經淋巴細胞內第二信使cAMP介導。
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【學位授予單位】：南通大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：2163259