【摘要】：目的:探討沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis,Ct)pORF5質(zhì)粒蛋白對IL-1β和IL-18等促炎性細(xì)胞因子的誘生作用,并初步分析其分子機制。方法:用0、3、6、12、24、36μg/ml不同濃度的pORF5蛋白刺激THP-1細(xì)胞,并于0、8、16、24、36 h收集上清及細(xì)胞,ELISA檢測IL-1β和IL-18的含量;Realtime-PCR檢測NALP3炎性復(fù)合體mRNA表達(dá)水平,Western blot鑒定Caspase-1活化狀態(tài);分別用NALP3 siRNA、ASC siRNA轉(zhuǎn)染THP-1細(xì)胞24 h或用Caspase-1特異性抑制劑(Z-YVADFMK)預(yù)處理THP-1細(xì)胞30 min后,再用24μg/ml的pORF5質(zhì)粒蛋白刺激THP-1細(xì)胞24 h,ELISA分析各處理因素對IL-1β和IL-18產(chǎn)生的影響。結(jié)果:pORF5質(zhì)粒蛋白以濃度依賴的方式刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β和IL-18。當(dāng)pORF5質(zhì)粒蛋白濃度為24μg/ml時,IL-1β和IL-18的表達(dá)水平最高,分別為491 pg/ml、186 pg/ml;同時pORF5質(zhì)粒蛋白以時間依賴的方式刺激THP-1細(xì)胞產(chǎn)生IL-1β和IL-18,兩者分別在24 h和16 h達(dá)到峰值。pORF5質(zhì)粒蛋白可增強THP-1細(xì)胞NALP3、ASC和Caspase-1 mRNA的表達(dá),促進(jìn)Caspase-1的活化;NALP3-siRNA、ASC-siRNA及Caspase-1抑制劑處理組IL-1β和IL-18的產(chǎn)生水平均顯著低于對照組(P0.05)。結(jié)論:pORF5質(zhì)粒蛋白通過激活NALP3炎性復(fù)合體誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞分泌IL-1β和IL-18。
[Abstract]:Objective: to investigate the inducing effect of Chlamydia trachomatisCt (Chlamydia trachomatisCt) pORF5 plasmid protein on proinflammatory cytokines such as IL-1 尾 and IL-18, and to analyze its molecular mechanism. Methods: THP-1 cells were stimulated with different concentrations of pORF5 protein at different concentrations of pORF5. The supernatants were collected and the contents of IL-1 尾 and IL-18 were detected by Elisa. MRNA expression of NALP3 inflammatory complex was detected by Realtime-PCR. Caspase-1 activation was identified by Western blot. THP-1 cells were transfected with NALP3 siRNA-ASC siRNA for 24 h or treated with Caspase-1 specific inhibitor (Z-YVADFMK) for 30 min, then THP-1 cells were stimulated with 24 渭 g/ml pORF5 plasmid protein for 24 h. The effects of different treatment factors on IL-1 尾 and IL-18 were analyzed by Elisa. Results the IL-1 尾 and IL-18 of THP-1 cells were stimulated by the plasmid protein of 1: pORF5 in a concentration-dependent manner. When the concentration of pORF5 plasmid protein was 24 渭 g/ml, the expression levels of IL-1 尾 and IL-18 were the highest. At the same time, pORF5 plasmid protein stimulated the production of IL-1 尾 and IL-18 in THP-1 cells in a time-dependent manner. The expression of NALP3ASC and Caspase-1 mRNA in THP-1 cells was enhanced by pORF5 plasmid protein at 24 h and 16 h, respectively. The levels of IL-1 尾 and IL-18 in NALP3-siRNA-ASC-siRNA and Caspase-1 inhibitor treatment group were significantly lower than those in control group (P0.05). Conclusion the expression of IL-1 尾 and IL-18 in THP-1 cells was induced by the activation of NALP3 inflammatory complex.
【作者單位】： 南華大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)研究所/特殊病原體防控湖南省重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81102230;No.31470277) 湖南省高校創(chuàng)新平臺開放基金(13K081) 湖南省高層次衛(wèi)生人才“225”工程培養(yǎng)項目(2013-13) 湖南省普通高校帶頭人資助項目(2014-186) 湖南省特殊病原體防控重點實驗室資助項目(2014-5) 分子靶標(biāo)新藥研究協(xié)同創(chuàng)新中心資助項目(2014-405)
【分類號】：R374.1

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2151509