【摘要】： 建立檢測單增李斯特菌(LM)的快速檢測方法,對人類健康及畜牧業(yè)生產(chǎn)具有重要的意義和應(yīng)用前景。本研究選取致病性李斯特菌特異性蛋白—肌動蛋白聚合蛋白(ActA)為對象,利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)ActA融合蛋白,以親合層析純化表達(dá)產(chǎn)物,獲得了較高純度的表達(dá)蛋白ActA。以純化的ActA蛋白免疫小鼠進(jìn)行免疫原性研究,結(jié)果表明ActA可激發(fā)機體產(chǎn)生特異性的細(xì)胞免疫和體液免疫,為以ActA蛋白為靶抗原,建立LM免疫學(xué)檢測方法的研究及LM疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。以LM為免疫抗原免疫Balb/c小鼠,以純化的ActA蛋白作為ELISA檢測的包被抗原,制備LM特異性單克隆抗體并進(jìn)行特性分析,辛酸—硫酸銨法結(jié)合G—蛋白親合層析法純化單抗腹水,選取兩株純化的單抗分別用于免疫膠體金的標(biāo)記和膠體金試紙檢測線的包被,研制檢測LM的膠體金試紙,研究結(jié)果表明該試紙具有較高的敏感性和特異性,可以從模擬樣本中有效地檢出LM。
[Abstract]:To establish a rapid detection method for Listeria monocytogenes (LM) has important significance and application prospect for human health and animal husbandry production. In this study, (ActA), a specific protein of Listeria sp., was used to express ActA fusion protein by prokaryotic expression system. The expressed product was purified by affinity chromatography, and a high purity expression protein ActA was obtained. The immunogenicity of mice immunized with purified ActA protein was studied. The results showed that ActA could stimulate specific cellular and humoral immunity, and ActA protein was used as target antigen. The establishment of LM immunological detection method and the development of LM vaccine laid a foundation. Balb/c mice were immunized with LM as immune antigen. The purified ActA protein was used as the coating antigen for ELISA detection. The monoclonal antibody against LM was prepared and its characteristics were analyzed. The monoclonal antibody ascites were purified by octanoic acid-ammonium sulfate method combined with G-protein affinity chromatography. Two purified McAbs were used to label immune colloidal gold and coated with colloidal gold test paper to prepare the colloidal gold test paper for LM detection. The results showed that the test paper had high sensitivity and specificity. LM can be effectively detected from simulated samples.
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R378;S854.43

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 柯春林;方維煥;;單增李斯特菌生物膜及其形成機制的研究進(jìn)展[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年06期

2 韓春來;;三種食源性致病菌多重?zé)晒釶CR檢測方法的建立[J];家禽科學(xué);2011年08期

3 ;[J];;年期

4 ;[J];;年期

5 ;[J];;年期

6 ;[J];;年期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

相關(guān)會議論文 前10條

1 張輝;王興龍;;單增李斯特菌ActA的表達(dá)、免疫原性及膠體金試紙研制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會成立大會暨第一次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2008年

2 龍軼;周小明;邢達(dá);;基于磁珠分離和超分支滾環(huán)擴增的單增李斯特菌電化學(xué)發(fā)光檢測[A];第七屆全國光生物學(xué)學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2010年

3 范蕓;胡云建;艾效曼;寧尚勇;程瑋;李江濤;常乃柏;;一起血液病區(qū)單增李斯特菌病的爆發(fā)并文獻(xiàn)復(fù)習(xí)[A];第十屆全國化療藥理暨抗感染藥理高峰論壇資料匯編[C];2010年

4 斯國靜;俞驊;劉濤;胡俊;;單核細(xì)胞增生李斯特菌在市售食品中污染現(xiàn)狀分析[A];2011年浙江省醫(yī)學(xué)會醫(yī)學(xué)病毒學(xué)分會、醫(yī)學(xué)微生物與免疫學(xué)分會學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2011年

5 馬保華;呂平;林日蘭;陳鋒;勞春霞;;使用Reveal試劑盒快速檢測單增李斯特菌的初步研究[A];全國人畜共患病學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2006年

6 鄭華英;江元山;呂均;熊燕;龍一兵;曾瑩春;;單增李斯特菌食品分離株多重PCR鑒定分型[A];2008年中國微生物學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2008年

7 狄慧玲;姜曉冰;石磊;;速凍食品中單增李斯特菌CRISPR位點分型及PFGE分型研究[A];2010年中國農(nóng)業(yè)工程學(xué)會農(nóng)產(chǎn)品加工及貯藏工程分會學(xué)術(shù)年會暨華南地區(qū)農(nóng)產(chǎn)品加工產(chǎn)學(xué)研研討會論文摘要集[C];2010年

8 郭倩倩;陶妍;謝晶;;南美白對蝦中四種病原菌的多重PCR檢測[A];2010年中國水產(chǎn)學(xué)會學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2011年

9 崔煥忠;張輝;趙權(quán);;單核細(xì)胞增生性李斯特菌主要毒力因子及致病機理[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜內(nèi)科學(xué)分會2009年學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2009年

10 孔保華;劉柳;;香辛料提取物在培養(yǎng)基及冷卻豬肉中對單核細(xì)胞增生性李斯特菌的抑制作用[A];2007年學(xué)術(shù)年會論文集[C];2007年

相關(guān)重要報紙文章 前5條

1 記者 胡冀;43種食品被驅(qū)出京城[N];中國食品質(zhì)量報;2004年

2 劉錚;煙臺局多措并舉確保進(jìn)口食品安全[N];中國國門時報;2009年

3 王艷 記者 田錦凡;貴州檢驗檢疫局[N];貴州政協(xié)報;2010年

4 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院食品非熱加工研究室 廖小軍;高靜壓技術(shù)之安全篇[N];中國食品報;2009年

5 記者 梁曉　通訊員 高世博 盧yN舟;我市完成食源性致病菌監(jiān)測檢驗[N];鄭州日報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前9條

1 陳健舜;單核細(xì)胞增多性李斯特菌分子進(jìn)化與酸應(yīng)激功能基因組學(xué)研究[D];浙江大學(xué);2010年

2 隋建新;單增李斯特菌雞卵黃抗體的抑菌性能及其機理研究[D];中國海洋大學(xué);2010年

3 張輝;單增李斯特菌ActA的表達(dá)、免疫原性及膠體金試紙研制[D];吉林大學(xué);2008年

4 郗遠(yuǎn);植物提取物對單增李斯特菌的抑制作用及乳化香腸的品質(zhì)影響[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

5 田靜;熟肉制品中單增李斯特菌的風(fēng)險評估及風(fēng)險管理措施的研究[D];中國疾病預(yù)防控制中心;2010年

6 殷月蘭;產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌減毒突變株的構(gòu)建及其免疫生物學(xué)特性的研究[D];揚州大學(xué);2006年

7 林文憑;Bacillus subtilis ZJU15產(chǎn)生的抗菌肽研究[D];浙江大學(xué);2010年

8 肖性龍;多重?zé)晒釶CR與液相芯片高通量病原體檢測體系的建立與應(yīng)用[D];華南理工大學(xué);2010年

9 陳默;大豆分離蛋白抑菌膜性能評價及抑菌劑釋放研究[D];江南大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 田媛;抗單增李斯特菌單克隆抗體制備方法的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 馮曉慧;單增李斯特菌在肉牛屠宰過程中的流行特點及其熱失活模型的建立[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 徐金亭;免疫磁珠的制備及其富集、分離單增李斯特菌的研究[D];暨南大學(xué);2011年

4 林婷婷;單增李斯特菌溶血素基因的原核表達(dá)及其單克隆抗體的制備[D];暨南大學(xué);2011年

5 路彥霞;莖環(huán)型引物—環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)檢測奶粉中單增李斯特菌的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

6 邸薇;單增李斯特菌iap、actA、plcB基因的原核表達(dá)、產(chǎn)物的免疫原性分析以及重組p60蛋白多抗的制備[D];暨南大學(xué);2012年

7 張耀祺;環(huán)介導(dǎo)等溫擴增法快速檢測食物中的單增李斯特菌[D];華南理工大學(xué);2012年

8 陳鋼;單增李斯特菌酶聯(lián)免疫吸附法的研究[D];南昌大學(xué);2010年

9 何勇琴;單核細(xì)胞增生性李斯特菌特異性抗體的制備研究[D];上海海洋大學(xué);2011年

10 苗曉莉;單核增生李斯特菌對于宿主抗病毒能力的影響[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2011年

，

本文編號：2150930