發(fā)布時(shí)間：2018-06-04 05:58

  本文選題：藥物性肝損傷(DILI) + 高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型��； 參考：《藥物評(píng)價(jià)研究》2015年04期

【摘要】：目的建立一種靈敏、快速的高細(xì)胞色素P450(CYPs)酶活性的大鼠原代肝細(xì)胞模型,用于評(píng)價(jià)經(jīng)CYPs酶代謝后產(chǎn)生肝毒性的藥物。方法分別采用苯巴比妥和β-萘黃酮兩種CYPs酶廣譜誘導(dǎo)劑構(gòu)建大鼠原代肝細(xì)胞模型;應(yīng)用"cocktail"探針底物法考察兩種誘導(dǎo)劑對(duì)CYPs酶的影響;以基于CYPs酶代謝導(dǎo)致肝毒性的藥物他克林(TAC)、雙氯芬酸鈉(DIC)和對(duì)乙酰氨基酚(PAR)為模型藥物,評(píng)價(jià)所構(gòu)建的高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型與普通大鼠原代肝細(xì)胞間靈敏性的差異;應(yīng)用所構(gòu)建的高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型評(píng)價(jià)維拉帕米(VER)的肝毒性。結(jié)果與普通大鼠原代肝細(xì)胞相比,3種模型藥物在高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞中,在較低劑量時(shí)可使細(xì)胞上清液中乳酸脫氫酶(LDH)、細(xì)胞中活性氧(ROS)水平升高,線粒體膜電位(MMP)水平下降,或相同劑量下得到更嚴(yán)重的損傷結(jié)果,CYPs酶抑制劑1-aminobenzotriazole(ABT)和metyrapone(MET)能抑制這3種損傷的發(fā)生;100μmol/L維拉帕米在普通大鼠原代肝細(xì)胞中并未引起LDH、ROS和MMP的改變,但在高CYPs活性大鼠原代肝細(xì)胞模型中,會(huì)引起細(xì)胞損傷,ABT和MET能抑制這種損傷。結(jié)論經(jīng)誘導(dǎo)建立的兩種高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型能更靈敏的評(píng)價(jià)基于CYPs酶代謝致毒藥物的肝毒性;兩種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)得到的高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型對(duì)經(jīng)不同CYPs酶亞型代謝的藥物評(píng)價(jià)結(jié)果有各自優(yōu)勢(shì)。應(yīng)用高CYPs酶活性大鼠原代肝細(xì)胞模型證實(shí)維拉帕米的致毒機(jī)制是經(jīng)CYPs酶代謝產(chǎn)生肝毒性。
[Abstract]:Objective to establish a sensitive and rapid rat hepatocyte model with high cytochrome P450 CYPsase activity and to evaluate the hepatotoxicity induced by CYPs enzyme metabolism. Methods the rat primary hepatocyte model was established with phenobarbital and 尾 -naphthalene flavonoids as extended-spectrum inducers, and the effects of two inducers on CYPs enzyme were investigated by "cocktail" probe substrate method. The CYPs enzyme metabolization-induced hepatotoxic drugs, tacrine, diclofenac sodium and paracetamol, were used as model drugs to evaluate the sensitivity of the primary hepatocyte model with high CYPs enzyme activity between the primary rat and the normal rat. The hepatotoxicity of verapamil was evaluated by using the rat primary hepatocyte model with high CYPs activity. Results compared with normal rat primary hepatocytes, three model drugs could increase the level of lactate dehydrogenase (LDH) and reactive oxygen species (Ros) in the supernatant at lower doses in the primary rat hepatocytes with high CYPs enzyme activity. The level of mitochondrial membrane potential (MMP) was decreased, or the damage was more serious at the same dose. The results showed that CYPs inhibitor 1-aminobenzotriazoledol (ABT) and metyrapone (MET) could inhibit the occurrence of these three kinds of damage, and verapamil did not cause the changes of LDHRos and MMP in the primary cultured rat hepatocytes. However, in the primary hepatocyte model of rats with high CYPs activity, cell damage could be inhibited by MET and ABT. Conclusion the two rat hepatocyte models with high CYPs enzyme activity can be more sensitive to evaluate the hepatotoxicity based on the metabolizing drugs of CYPs enzyme. The rat primary hepatocyte models with high CYPs enzyme activity induced by two inducers had their own advantages in the evaluation of drug metabolism by different CYPs isoforms. The primary rat hepatocyte model with high CYPs activity confirmed that the toxic mechanism of verapamil was induced by the metabolism of CYPs enzyme.
【作者單位】： 天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院;省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81373890) 教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金(No.20121210110011) 教育部長江學(xué)者與創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)發(fā)展計(jì)劃(No.IRT-14R41)
【分類號(hào)】：R329.2

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