發(fā)布時間：2018-05-24 00:51

  本文選題：牛結(jié)核病 + MPT蛋白　； 參考：《微生物學(xué)報》2015年02期

【摘要】：【目的】利用大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)并純化結(jié)核分枝桿菌MPT83蛋白,通過小鼠模型評價其免疫原性,建立血清學(xué)間接ELISA方法用于牛結(jié)核病臨床檢測,評價其應(yīng)用潛能�！痉椒ā繕�(gòu)建p ET30a(+)-mpt83重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化BL21(DE3)誘導(dǎo)表達(dá)并純化,經(jīng)細(xì)胞表面分子的流式細(xì)胞術(shù)(Flow Cytometry,FCM)分析、ELISPOT試驗等分析其在小鼠中的免疫原性,建立間接ELISA方法,檢測臨床奶牛血樣,評價其用于牛結(jié)核病血清學(xué)檢測的潛能。【結(jié)果】SDS-PAGE顯示目的蛋白成功表達(dá),Western blot證實其對兔抗H37Rv多抗血清具有良好免疫反應(yīng)性;FCM結(jié)果顯示其下調(diào)樹突狀細(xì)胞表面CD80分子的表達(dá),上調(diào)小鼠脾臟CD4+和CD8+T細(xì)胞表面CD69的表達(dá),ELISPOT結(jié)果表明其誘導(dǎo)的特異性IL-4分泌細(xì)胞數(shù)顯著高于IFN-γ分泌細(xì)胞數(shù),表現(xiàn)為Th2型免疫應(yīng)答;建立了ELISA方法,檢測臨床奶牛血樣200份,與牛結(jié)核外周血γ-干擾素體外釋放試驗結(jié)果的陽性符合率和陰性符合率分別為48.6%和90%。【結(jié)論】在大腸桿菌系統(tǒng)中高效可溶性表達(dá)MPT83蛋白,其在小鼠模型中主要呈現(xiàn)Th2型免疫應(yīng)答,并以該蛋白為抗原建立了牛結(jié)核病血清學(xué)檢測的間接ELISA方法。
[Abstract]:[objective] to express and purify Mycobacterium tuberculosis MPT83 protein by Escherichia coli system, evaluate its immunogenicity by mouse model, and establish a serological indirect ELISA method for clinical detection of bovine tuberculosis. [methods] the recombinant plasmid pET30a (pET30a) was constructed and transformed into BL21DE3 to induce its expression and purification. The immunogenicity of pET30a in mice was analyzed by flow Cytometry FCM and indirect ELISA method was established. Blood samples of clinical cows were detected. [results] SDS-PAGE showed that the target protein was expressed successfully. Western blot confirmed that it had a good immunoreactivity to rabbit anti-H37Rv polyantibody serum. The results showed that it down-regulated the expression of CD80 molecule on dendritic cell surface. The expression of CD69 on the surface of CD4 and CD8 T cells in the spleen of mice was up-regulated. The results showed that the number of specific IL-4 secreting cells induced by Elispot was significantly higher than that of IFN- 緯 secreting cells, which was characterized by Th2 type immune response. The positive coincidence rate and negative coincidence rate of IFN- 緯 release from bovine tuberculosis peripheral blood in vitro were 48.6% and 90.1%, respectively. [conclusion] MPT83 protein was highly expressed in Escherichia coli system. The Th2 type immune response was mainly present in the mouse model, and the indirect ELISA method for the detection of bovine tuberculosis serology was established with this protein as antigen.
【作者單位】： 揚州大學(xué) 江蘇省人獸共患病學(xué)重點實驗室/江蘇省動物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;無錫市動物疫病預(yù)防控制中心;
【基金】：國家“973項目”(2012CB518805) 國家星火計劃項目(2014GA690017) 揚州市自然科學(xué)基金項目(YZ2014027) 江蘇高校優(yōu)勢學(xué)科建設(shè)工程資助項目~~
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1927052