本文選題：外源性硫化氫　切入點(diǎn)：鈣化　出處：《南華大學(xué)》2010年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 背景與目的:異位鈣化即非骨組織發(fā)生礦物質(zhì)沉積,主要是鈣鹽沉積,血管組織鈣化是其中的一種,分為中膜鈣化和內(nèi)膜鈣化。后者與動(dòng)脈粥樣硬化密切相關(guān),早期參與的細(xì)胞主要是巨噬細(xì)胞和肥大細(xì)胞。硫化氫具有重要的心血管生理與病理作用,本實(shí)驗(yàn)擬利用硫氫化鈉(Sodium hydrosulfide, NaHS)作為硫化氫的外源性供體,在β-甘油磷酸鈉(β-sodium glycerophosphate,β-GP)和氧化低密度脂蛋白(Oxidized low density lipoprotein,oxLDL)誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞鈣鹽沉積的模型上研究外源性硫化氫對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)過程中鈣化的影響及其發(fā)揮作用的影響因素,為進(jìn)一步探討其對(duì)內(nèi)膜鈣化的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法: 實(shí)驗(yàn)1:細(xì)胞模型的建立:小鼠單核巨噬細(xì)胞用5mmol/L的β-甘油磷酸鈉和40mg/mL的oxLDL孵育3天,Von kossa染色形態(tài)學(xué)觀察細(xì)胞鈣鹽沉積,原子吸收分光光度法測(cè)定細(xì)胞鈣含量。 實(shí)驗(yàn)2:外源性硫化氫對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)過程中細(xì)胞鈣化的影響 (1)不同濃度NaHS對(duì)細(xì)胞鈣化的影響:小鼠單核巨噬細(xì)胞在鈣化條件培養(yǎng)同時(shí)加入不同濃度的NaHS(0,25,50,100,200μmol/L)孵育6天,原子吸收分光光度法測(cè)量細(xì)胞鈣含量,?液閃爍儀檢測(cè)鈣沉積,Western blot檢測(cè)OPN蛋白和RT-PCR檢測(cè)OPN mRNA表達(dá)。 (2)不同時(shí)間NaHS處理對(duì)細(xì)胞鈣化的影響:小鼠單核巨噬細(xì)胞在鈣化條件培養(yǎng)同時(shí)加入最佳作用濃度NaHS分別孵育細(xì)胞0、2、4、6天(D)。原子吸收分光光度法和?液閃爍儀分別觀察細(xì)胞鈣含量及沉積,Western blot及RT PCR分別測(cè)定OPN蛋白和OPN mRNA表達(dá)情況。 實(shí)驗(yàn)3:外源性硫化氫對(duì)細(xì)胞鈣化作用的影響因素的探討 (1)氧化作用:用400μmol/L過氧化氫刺激細(xì)胞內(nèi)活性氧水平升高,觀察活性氧對(duì)硫化氫作用的影響,原子吸收分光光度法和?液閃爍儀分別觀察細(xì)胞鈣含量及沉積,Western blot及RT PCR分別測(cè)定OPN蛋白和OPN mRNA表達(dá)情況。 (2)炎癥因子的作用:給予10ng/mL外源性炎癥因子白介素-6(Interleukin-6,IL-6)刺激,觀察其對(duì)硫化氫作用的影響。原子吸收分光光度法和?液閃爍儀分別觀察細(xì)胞鈣含量及沉積,Western blot及RT PCR分別測(cè)定OPN蛋白和OPN mRNA表達(dá)情況。 結(jié)果: 1.與正常對(duì)照組細(xì)胞相比,ox-LDL與β-甘油磷酸鈉共孵育的細(xì)胞,Von kossa染色后可見細(xì)胞內(nèi)有大量的黑色顆粒沉積,鈣含量比正常細(xì)胞內(nèi)高7.7倍(p 0.05)。而單獨(dú)用ox-LDL或β-甘油磷酸鈉孵育細(xì)胞,細(xì)胞內(nèi)僅見少量的黑色顆粒沉積。說明巨噬細(xì)胞在ox-LDL和甘油磷酸鈉共孵育誘導(dǎo)下可明顯促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)鈣鹽積聚沉積。 2.與鈣化組細(xì)胞相比,隨著NaHS濃度和作用時(shí)間的增加,細(xì)胞鈣含量和鈣沉積逐漸減少,OPN蛋白和mRNA表達(dá)也逐漸減少,特別是100μmol/LNaHS作用4D組與未用NaHS(即0μmol/L)組相比,鈣含量和鈣沉積分別減少6.5倍和7.2倍(p 0.05),OPN蛋白和mRNA表達(dá)也分別減少了5倍和4.8倍(p 0.05)。 3.與正常細(xì)胞組相比,鈣化組細(xì)胞內(nèi)活性氧明顯增加,加入H2O2后,NaHS抑制鈣鹽沉積作用被阻止,細(xì)胞鈣鹽沉積加重,與NaHS處理組相比,OPN mRNA和蛋白表達(dá)上升2.9倍和3.1倍(p 0.05),細(xì)胞鈣含量和鈣沉積增加了6.7倍和7.1倍(p 0.05)。 4.鈣化細(xì)胞炎癥因子腫瘤壞死因子-?(TNF-?)產(chǎn)生增多,加入炎癥因子白介素-6(IL-6)后,NaHS抑制鈣鹽沉積作用被阻止,細(xì)胞鈣化加重。 結(jié)論: 1. ?-甘油磷酸鈉和ox-LDL聯(lián)合應(yīng)用可成功復(fù)制巨噬細(xì)胞鈣化模型 2.外源性硫化氫以濃度和時(shí)間依賴性方式緩解巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)過程中的鈣鹽沉積,推測(cè)可抑制內(nèi)膜鈣化。 3.炎癥因子IL-6和氧化作用可阻止外源性硫化氫對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬脂質(zhì)過程中鈣鹽沉積的抑制作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 江海龍,吳宏超,李志梁,耿彬,唐朝樞;冠心病患者血漿中新型氣體信號(hào)分子硫化氫的變化[J];第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年08期

2 張春雨,杜軍保,卜定方,閆輝,斯琴,唐朝樞;低氧性肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織硫化氫的變化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2004年02期

3 王燕飛;唐朝樞;杜軍保;;硫化氫抑制apoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化中ICAM-1的表達(dá)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2009年01期

4 翟永志;晏沐陽(yáng);;動(dòng)脈粥樣硬化鈣化與易損斑塊[J];心血管康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志;2007年06期

，

本文編號(hào)：1597028