本文關(guān)鍵詞：膠質(zhì)瘤干細胞的3D培養(yǎng)及其核酸適體篩選的探索，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:1、擬采用3D培養(yǎng)技術(shù)模擬體內(nèi)環(huán)境研究膠質(zhì)瘤干細胞增殖的異質(zhì)性及一些生物特性。2、在體外進行人工合成核酸適體文庫合成,使用Cell-SELEX技術(shù)進行篩選,以期得到可以特異性識別膠質(zhì)瘤干細胞的核酸適體。方法:1、利用微孔陣列芯片技術(shù)制作出高通量微膠原蛋白陣列,然后使用固定力的按壓方式,使細胞均勻分布于陣列中,形成三維培養(yǎng)模型。三維長期培養(yǎng)條件下,進行高通量膠質(zhì)瘤干細胞單細胞異質(zhì)性分析。2、使用化學(xué)方法人工合成的隨機寡核苷酸庫,以體外培養(yǎng)的的人膠質(zhì)母細胞瘤細胞系U251細胞誘導(dǎo)出的膠質(zhì)瘤干細胞為靶細胞,以人膠質(zhì)母細胞瘤細胞系U251細胞為反篩細胞,利用Cell-SELEX技術(shù),進行核酸適體篩選。結(jié)果:1、膠質(zhì)瘤細胞可以高通量微膠原蛋白陣列中長期存活,并且增殖,細胞活性沒有影響。2、經(jīng)過7天、30天培養(yǎng),觀察、鑒定,3D培養(yǎng)條件下可以觀察到膠質(zhì)瘤干細胞與膠質(zhì)瘤細胞之間的增殖能力差異及各自細胞傳代過程中異質(zhì)性。3、經(jīng)過15輪循環(huán)的篩選得到了可以結(jié)合膠質(zhì)瘤干細胞的核酸適體文庫4、這個核酸適體庫可以很好地與人腦膠質(zhì)瘤干細胞結(jié)合,而不與人腦膠質(zhì)瘤細胞系U251相結(jié)合。結(jié)論:1、建立了一種高通量單細胞三維培養(yǎng)平臺,用于膠質(zhì)瘤干細胞細胞異質(zhì)性的分析。膠質(zhì)瘤子細胞傳代具有局限性,而膠質(zhì)瘤干細胞幾乎可以無限增殖。2、篩選得到的核酸適配體庫可以特異性的結(jié)合于靶細胞表面的靶標(biāo)蛋白分子,為適配體在尋找膠質(zhì)瘤干細胞的生物標(biāo)志物,以及膠質(zhì)瘤的靶向載藥、術(shù)后化療、術(shù)中導(dǎo)航等研究領(lǐng)域的應(yīng)用奠定了一定的基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：膠質(zhì)瘤干細胞 核酸適體 配體的指數(shù)富集系統(tǒng)進化 3D 培養(yǎng)
【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R739.41
【目錄】：

• 英文縮略表5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 第一部分 膠質(zhì)瘤干細胞的 3D培養(yǎng)11-24
• 1.1 引言11
• 1.2 實驗材料11-12
• 1.3 實驗方法12-15
• 1.3.1 細胞培養(yǎng)12-13
• 1.3.2 SU 8 模板的制作13
• 1.3.3 μCGA的制作13-14
• 1.3.4 單細胞增殖能力異質(zhì)性分析14
• 1.3.5 膠質(zhì)瘤干細胞的CD133及Nestin鑒定14-15
• 1.4 結(jié)果15-21
• 1.4.1 μCGA單細胞捕獲15-16
• 1.4.2 μCGA單細胞長期培養(yǎng)可行性實驗16
• 1.4.3 三維培養(yǎng)條件下的單細胞增殖能力異質(zhì)性分析16-20
• 1.4.4 膠質(zhì)瘤干細胞的鑒定20-21
• 1.5 討論21-23
• 1.6 小結(jié)23-24
• 第二部分、膠質(zhì)瘤干細胞核酸適體篩選及應(yīng)用24-39
• 2.1 引言24-26
• 2.2 實驗材料26-29
• 2.2.1 試劑與儀器26-28
• 2.2.2 DNA文庫合成28-29
• 2.3 實驗方法29-32
• 2.3.1 細胞培養(yǎng)29
• 2.3.2 膠質(zhì)瘤干細胞的核酸適體篩選29-31
• 2.3.3 檢測庫的富集情況31-32
• 2.4 結(jié)果32-36
• 2.4.1 細胞培養(yǎng)32-33
• 2.4.2 瓊脂糖電泳凝膠圖33
• 2.4.3 流式細胞儀監(jiān)測核酸適體的篩選進程33-34
• 2.4.4 富集庫的親和力測定34-36
• 2.5 討論36-39
• 2.6 小結(jié)39
• 全文結(jié)論39-40
• 參考文獻40-45
• 綜述45-59
• 參考文獻55-59
• 致謝59

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本文編號：475668