本文關(guān)鍵詞：Treg細(xì)胞在MOG誘導(dǎo)的EAE免疫耐受中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景與目的多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis,MS)是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)性炎性疾病,神經(jīng)系統(tǒng)軸突髓磷脂鞘破壞。患者早期可出現(xiàn)肌肉和關(guān)節(jié)隱痛,疲勞無(wú)力,僵硬等癥狀。隨著病情的加重,患者可出現(xiàn)感覺(jué)障礙、視力損傷和尿失禁等。MS是最常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥疾病,主要患病人群是男性青壯年。多種非特異性免疫抑制劑雖可控制早期MS疾病進(jìn)展,但對(duì)嚴(yán)重的患者治療效果較差,且有很大的毒副作用。因此,尋求MS新的療法是很多研究者努力的方向。實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是研究MS的動(dòng)物模型,是用人中樞神經(jīng)系統(tǒng)抗原成分髓磷脂免疫動(dòng)物發(fā)展成的一種自身免疫性脫髓鞘疾病。髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG),髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)和蛋白脂質(zhì)蛋白(proteolipid protein,PLP)均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生EAE。髓磷脂特異性Th1和Th17炎性細(xì)胞遷移至CNS,誘導(dǎo)中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥,引起髓鞘脫失,是EAE的主要致病細(xì)胞。MOG肽免疫可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生EAE,然而EAE誘導(dǎo)的第6天腹腔再次注射MOG肽可預(yù)防EAE發(fā)病。Treg是維持自身免疫耐受的重要細(xì)胞。MOG肽誘導(dǎo)的EAE免疫耐受是否與MOG肽誘導(dǎo)產(chǎn)生Treg有關(guān)尚待進(jìn)一步研究。這是本課題擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題。方法(1)MOG肽免疫C57小鼠,MOG35-55肽;弗氏佐劑,結(jié)核桿菌,磷酸鹽緩沖液(PBS)乳化后,小鼠背部皮下注射(200u L/只),每組8只,分為3組,EAE組(MOG誘導(dǎo)組)、MOG治療組、OVA組(分別在免疫第6-15天腹腔注射MOG、OVA肽,50 mg每只每天)。(2)臨床評(píng)分、脊髓組織冰凍切片HE染色,評(píng)價(jià)MOG肽的治療效果。(3)取腦和脊髓組織,研磨制備組織勻漿,percoll梯度密度法分離組織中浸潤(rùn)的單個(gè)核細(xì)胞,PMA、Ionomycin培養(yǎng)細(xì)胞6 h,流式分析中樞神經(jīng)系統(tǒng)Th1和Th17細(xì)胞的表達(dá)。(4)取小鼠脾臟,制成單個(gè)核細(xì)胞混合懸液,流式分析CD4+CD25+FOXP3+(Treg)調(diào)節(jié)細(xì)胞的表達(dá)。(5)磁珠分選CD4+CD25+T細(xì)胞,檢測(cè)細(xì)胞純度,然后將分選細(xì)胞加入到MOG-T細(xì)胞增殖體系中,細(xì)胞培養(yǎng)3天后加H3-Td R,繼續(xù)培養(yǎng)16 h后γ閃爍計(jì)數(shù)儀檢測(cè)cpm值。結(jié)果(1)MOG肽治療組小鼠臨床評(píng)分明顯減輕,OVA肽無(wú)治療效果(臨床評(píng)分:EAE組,3.7±0.3;MOG組,0;P0.01)。(2)EAE組小鼠脊髓中有很多炎性細(xì)胞浸潤(rùn),MOG治療后,組織切片脊髓炎性細(xì)胞明顯浸潤(rùn)減少。(3)未治療組(EAE)CNS中IFN-γ為52.1%,IL-17細(xì)胞為2.01%;MOG治療組CNS中IFN-γ為3.57%,IL-17為0.557%,MOG治療使CNS炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少。(4)MOG治療組與未治療組(EAE)脾臟內(nèi)調(diào)節(jié)細(xì)胞的比例無(wú)明顯變化。初始小鼠7.19%,EAE組5.77%,MOG治療組4.73%。(5)磁珠分選出的未治療組和MOG治療組小鼠脾臟Treg細(xì)胞,對(duì)MOG-T細(xì)胞的增殖具有相同的抑制功能。H3-Td R摻入法檢測(cè)Treg細(xì)胞的功能無(wú)明顯的變化。結(jié)論MOG可預(yù)防和治療EAE。Treg細(xì)胞在疾病的發(fā)展和治療過(guò)程中細(xì)胞比例無(wú)明顯的變化,對(duì)MOG-T細(xì)胞具有相同的抑制功能。所以對(duì)疾病的治療不起關(guān)鍵作用。
【關(guān)鍵詞】：MOG EAE Treg細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R744.51
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-11
• 中英文縮寫(xiě)詞表11-12
• 前言12-14
• 實(shí)驗(yàn)材料和方法14-19
• 結(jié)果19-24
• 討論24-30
• 結(jié)論30-31
• 參考文獻(xiàn)31-38
• 綜述 調(diào)節(jié)細(xì)胞的表型和功能38-58
• 參考文獻(xiàn)51-58
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷58
• 在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文58-59
• 致謝59

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本文編號(hào)：437437