目的探討miR-1197是否通過抑制O6-甲基鳥嘌呤DNA甲基轉移酶(MGMT)的表達影響膠質瘤對替莫唑胺的耐藥性。方法采用qRT-PCR檢測膠質瘤及非腫瘤腦組織中miR-1197的表達水平,CCK-8及單克隆實驗檢測膠質瘤細胞的增殖能力,流式細胞術檢測膠質瘤細胞的凋亡率。應用Western blot檢測膠質瘤組織及細胞中MGMT及相關蛋白的表達;用熒光素酶基因報告實驗驗證miR-1197與MGMT的結合。用裸鼠皮下成瘤實驗驗證miR-1197對膠質瘤對替莫唑胺耐藥性的影響。結果生物醫(yī)學數(shù)據(jù)庫及膠質瘤組織樣本分析顯示miR-1197在膠質瘤中低表達。熒光素酶基因報告實驗顯示,miR-1197可以與MGMT的3'-UTR相結合,過表達miR-1197可抑制MGMT的表達。單克隆及流式細胞術結果表明,miR-1197過表達可促進替莫唑胺誘導的細胞凋亡,但其可以被MGMT所逆轉。裸鼠皮下成瘤實驗表明miR-1197過表達增加膠質瘤對替莫唑胺的敏感性。結論 miR-1197通過與MGMT的3'-UTR相結合,抑制MGMT表達,進而促進膠質瘤對替莫唑胺的敏感性。

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圖1 膠質瘤組織的miR-1197表達及相關基因的分析

生物信息學軟件預測分析發(fā)現(xiàn)MGMT的3"-UTR端含有一個miR-1197的結合位點(圖2A)。通過熒光素酶基因報告實驗發(fā)現(xiàn)，miR-1197可顯著抑制野生型MGMT報告基因質粒的熒光強度，而結合位點的突變則可阻止miR-1197對報告基因質粒的熒光強度的影響(圖2B)。本研究分....

圖2 miR-1197直接靶向抑制MGMT的表達

圖1膠質瘤組織的miR-1197表達及相關基因的分析2.3miR-1197通過MGMT影響膠質瘤細胞的TMZ耐藥性

圖3 miR-1197過表達增加膠質瘤細胞對TMZ的敏感性

裸鼠皮下成瘤體內(nèi)實驗結果顯示，轉染miR-1197的實驗組裸鼠的腫瘤明顯小于對照組(圖4A)，腫瘤細胞的生長速度顯著慢于對照組(圖4C)，且腫瘤質量也小于對照組(圖4D)。免疫組化分析表明，實驗組MGMT的水平顯著低于對照組(圖4B)。Westernblot實驗顯示MGMT在膠....

圖4 miR-1197過表達增強TMZ對皮下膠質瘤的抑制作用

圖3miR-1197過表達增加膠質瘤細胞對TMZ的敏感性3討論

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