目的:明確mi R-448-3p對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤發(fā)展的影響。方法:我們通過(guò)結(jié)扎左側(cè)腎動(dòng)脈和左側(cè)頸總動(dòng)脈的方法建立大鼠IA模型;qRT-PCR用于檢測(cè)mi R-448-3p表達(dá);qRT-PCR和western blot用于檢測(cè)KLF5 m RNA和蛋白表達(dá);qRT-PCR和ELISA法用于檢測(cè)炎癥因子水平。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)IA誘導(dǎo)大鼠中mi R-448-3p表達(dá)下調(diào),而KLF5表達(dá)上調(diào)。我們發(fā)現(xiàn)并鑒定出KLF5是平滑肌細(xì)胞中mi R-448-3p的直接靶點(diǎn)。此外,mi R-448-3p處理使得IA誘導(dǎo)4周后動(dòng)脈瘤大小和瘤腔截面積變小。mi R-448-3p處理保護(hù)了IA誘導(dǎo)后的壁厚比,抑制了巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)。IAs引起KLF5表達(dá)顯著增加,被mi R-448-3p處理后表達(dá)顯著降低。我們還發(fā)現(xiàn)mi R-448-3p在脂多糖誘導(dǎo)的RAW 264.7巨噬細(xì)胞中具有抗炎作用。脂多糖促進(jìn)KLF5、MMP2、MMP9的表達(dá)水平,但卻被mi R-448-3p所抑制。結(jié)論:研究結(jié)果表明,mi R-448-3p可以抑制IA的進(jìn)展,其機(jī)制可能是通過(guò)下調(diào)KLF5的介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。

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【部分圖文】：

圖1在IA大鼠模型中，KLF5表達(dá)上調(diào)，而miR-448-3p表達(dá)下調(diào)。（A)IA誘導(dǎo)4周后，IA誘導(dǎo)模型組和假手術(shù)組大鼠ACA/OA分叉的HE染色。（B,C）通過(guò)qRT-PCR分析，miR-448-3p和KLF5在IA大鼠和假手術(shù)組大鼠動(dòng)脈壁中的表達(dá)。（D)Westernblot法檢測(cè)KLF5蛋白表達(dá)。*P<0.05。

我們通過(guò)結(jié)扎左腎動(dòng)脈和左頸總動(dòng)脈建立大鼠IA模型。與對(duì)照大鼠相比，動(dòng)脈瘤大鼠模型誘導(dǎo)4周后大腦前動(dòng)脈/嗅動(dòng)脈分叉部分的HE染色顯示動(dòng)脈瘤壁較薄及其破壞性嚴(yán)重（圖1A）。為了探究miR-448-3p和KLF5在IA中的作用，我們首先檢測(cè)了miR-448-3p和KLF5在IA大鼠....

圖2KLF5是miR-448-3p的直接靶點(diǎn)。（A)miR-448-3pKLF53′UTR野生型（Wt）或突變體（Mt）目標(biāo)序列。（B）螢光素酶實(shí)驗(yàn)。（C)miR-448-3p在轉(zhuǎn)染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對(duì)照的SMCs中表達(dá)。（D,E)KLF5在轉(zhuǎn)染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對(duì)照的SMCs中mRNA和蛋白表達(dá)。*P<0.05。

動(dòng)脈瘤的發(fā)生和發(fā)展涉及復(fù)雜的病理機(jī)制，但I(xiàn)A的分子發(fā)病機(jī)制尚不清楚。在本研究中，我們建立了IA大鼠模型，發(fā)現(xiàn)IA大鼠動(dòng)脈壁中miR-448-3p表達(dá)較對(duì)照組減少，而KLF5表達(dá)增加。我們發(fā)現(xiàn)miR-448-3p通過(guò)其對(duì)巨噬細(xì)胞的抗炎作用防止了IA的生長(zhǎng)。KLF5被發(fā)現(xiàn)是mi....

圖3miR-448-3p治療對(duì)IA誘導(dǎo)有較強(qiáng)的預(yù)防作用。（A,B）檢測(cè)miR-448-3p和KLF5在IA組和IA+miR-448-3p組中的表達(dá)。在IA誘導(dǎo)后4周制備ACA/OA分叉處誘導(dǎo)的IA標(biāo)本，并測(cè)量（C）動(dòng)脈瘤大小，（D）壁厚比，（E）動(dòng)脈瘤管腔面積和（F）巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)病灶的數(shù)目。*P<0.05。

圖2KLF5是miR-448-3p的直接靶點(diǎn)。（A)miR-448-3pKLF53′UTR野生型（Wt）或突變體（Mt）目標(biāo)序列。（B）螢光素酶實(shí)驗(yàn)。（C)miR-448-3p在轉(zhuǎn)染miR-448-3pmimic模擬物或陰性對(duì)照的SMCs中表達(dá)。（D,E)KLF5....

圖4miR-488-3p過(guò)表達(dá)抑制IA中巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)和活化。（A-D)qRT-PCR法檢測(cè)CD68、MCP-1、TNF-α和IL-6在IA大鼠和miR-488-3p處理IA大鼠組動(dòng)脈壁中的表達(dá)。（E)ELISA法檢測(cè)炎性細(xì)胞因子MCP-1、TNF-α和IL-6水平。（F)Westernblot檢測(cè)KLF5、MMP2、MMP9蛋白在對(duì)照組、LPS組和LPS+miR-448-3p組中的表達(dá)情況。*P<0.05。

研究表明KLF5參與低氧肺動(dòng)脈高壓、心肌肥厚和動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展[18-20]。一項(xiàng)研究表明，在腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)展過(guò)程中，足細(xì)胞的形成和巨噬細(xì)胞的遷移需要依賴于KLF5對(duì)Myo9b/RhoA的調(diào)節(jié)[21]。然而，KLF5參與IA形成的可能作用和機(jī)制尚不清楚。在此，我們確定KLF5....

本文編號(hào)：3981134