本文關(guān)鍵詞：乙醇誘導(dǎo)C2C12成肌細胞E3連接酶Atrogin-1表達的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：酒精相關(guān)的肌病的特點是嚴重的骨骼肌生化和結(jié)構(gòu)的變化,肌萎縮是其臨床表現(xiàn)之一。乙醇在機體代謝過程中產(chǎn)生大量的活性氧(ROS)和自由基,引起細胞的氧化應(yīng)激和脂質(zhì)過氧化。泛素連接酶是骨骼肌萎縮中的關(guān)鍵酶,目前已將泛素連接酶E3s中的Atrogin-1作為檢測肌萎縮發(fā)生的早期生物標記物。在一些肌萎縮模型研究中發(fā)現(xiàn),ROS可激活MAPK里的P-38通路,上調(diào)Atrogin-1的表達,繼而引起肌萎縮。但乙醇與肌萎縮之間的研究甚少,且大都集中在動物模型,本實驗以乙醇(100mM)染毒C2C12成肌細胞為模型,來探究乙醇引起肌萎縮的機制及具體信號通路。目的:本研究通過體外培養(yǎng)小鼠C2C12骨骼肌成肌細胞,觀察乙醇對骨骼肌細胞的氧化損傷情況,及Atrogin-1的蛋白表達水平,研究在C2C12成肌細胞模型中,乙醇對Atrogin-1蛋白水平的影響,并探討其中涉及的細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,為抑制肌肉萎縮提供新的治療方法。方法:1.乙醇(100mM)、NAC(2uM)處理C2C12細胞24小時后,采用熒光酶標儀檢測不同組之間ROS水平;2.乙醇(100mM)分別作用于C2C12細胞不同時間,分別為0h、8h、16h、24h,然后檢測各個不同組之間Atrogin-1蛋白水平的表達,觀察不同的處理時間對Atrogin-1蛋白水平的表達有無變化;3.乙醇(100mM)、NAC(2uM)處理C2C12細胞8小時后,用Western Blot實驗技術(shù)檢測不同組之間Atrogin-1蛋白水平的表達;4.乙醇(100mM)、NAC(2u M)處理C2C12細胞8小時后,用Western Blot實驗技術(shù)檢測磷酸化P-38蛋白水平的表達;加入MAPK細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的P38通路抑制劑SB203580,用Western Blot實驗技術(shù)檢測不同組Atrogin-1蛋白水平的表達,觀察SB203580對Atrogin-1蛋白的表達是否有影響。結(jié)果:1.乙醇(100mM)作用于C2C12細胞24小時后,ROS水平升高,與正常組有顯著性差異(P0.05);但NAC(2uM)預(yù)處理后,ROS水平降低;2.在乙醇(100m M)作用于細胞8-24小時中,Atrogin-1蛋白水平與對照組相比,均有顯著性差異(P0.05),且在8小時表達最多;3.乙醇(100mM)作用C2C12細胞8小時后,Atrogin-1蛋白水平明顯升高,與對照組有顯著性差異(P0.05),但NAC(2u M)預(yù)處理后,由乙醇引起的升高的Atrogin-1蛋白水平下降;4.乙醇(100mM)作用C2C12細胞8小時后,磷酸化蛋白P-38水平明顯升高,與對照組有顯著性差異(P0.05),但經(jīng)NAC(2u M)預(yù)處理后,由乙醇引起的升高的P-38磷酸化水平下降;加入抑制劑SB203580后,與乙醇組相比,Atrogin-1蛋白水平明顯降低。結(jié)論:1.乙醇(100mM)可引起C2C12細胞中活性氧產(chǎn)生的增加,誘發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)。NAC(2uM)可降低由乙醇引起的ROS升高。2.ROS可通過MAPK信號通路里的P-38途徑引起Atrogin-1蛋白水平升高。
【關(guān)鍵詞】：乙醇 C2C12 ROS P-38通路 Atrogin-1
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R746
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 前言11-12
• 材料與方法12-18
• 一、實驗材料12-15
• （一）、實驗對象12
• （二）、主要實驗儀器12-13
• （三）、主要實驗試劑13
• （四）、主要試劑的配制13-15
• 二、實驗方法15-18
• （一）、細胞培養(yǎng)15
• （二） 乙醇及NAC對C2C12細胞內(nèi)活性氧的影響15-16
• （三）、乙醇作用不同時間對Atrogin-1 表達的影響16-17
• （四）、乙醇及NAC對C2C12細胞Atrogin-1 表達的影響17
• （五）、乙醇誘導(dǎo)Atrogin-1 高表達與MAPK通路的關(guān)系17-18
• 三、統(tǒng)計學(xué)分析18
• 結(jié)果18-21
• 1.乙醇及NAC對C2C12細胞活性氧的影響18-19
• 2.乙醇作用不同時間對Atrogin-1 表達的影響19-20
• 3.乙醇及NAC對C2C12細胞Atrogin-1 表達的影響20
• 4.P38MAPK信號通路對乙醇誘導(dǎo)Atrogin-1 表達的影響20-21
• 討論21-24
• 結(jié)論24
• 參考文獻24-29
• 綜述29-39
• 參考文獻33-39
• 致謝39-40

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